骨肉瘤組織凋亡誘導(dǎo)因子與波形蛋白表達(dá)及其臨床意義的探討.pdf

1、目的
　　 探討凋亡誘導(dǎo)因子(apoptosis inducing factor,AIF)與波形蛋白(vimentin,VIM)的表達(dá)與骨肉瘤患者的年齡、性別、病程分級(jí)、腫瘤的體積、分化程度、腫瘤的轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系,其中以“AIF/VIM兩者之間的相互關(guān)系”以及“兩種因子與腫瘤的分級(jí)轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)關(guān)系”為研究重點(diǎn)。
　　 方法
　　 標(biāo)本取自1990年1月至2010年1月在中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院骨科活檢及手術(shù)切除

2、的組織共75例,其中骨肉瘤45例,骨軟骨瘤標(biāo)本30例。所有患者術(shù)前未行放、化療。骨肉瘤患者,年齡12～73歲,中位年齡33.2歲,平均38.2歲;其中低度惡性,組織分化中等的G1期骨肉瘤標(biāo)本15例,高度惡性組織分化差的G2期骨肉瘤標(biāo)本30例,所有病例術(shù)前均未化療跟放療。取良性的骨軟骨瘤30例作為對(duì)照觀(guān)察。
　　 采用鏈霉素親生物素-過(guò)氧化物酶免疫組織化學(xué)技術(shù)(SP法)作VIM和AIF抗原檢測(cè),用已知的AIF和VIN抗原陽(yáng)性的宮頸

3、癌癌組織作為陽(yáng)性對(duì)照,用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。石蠟切片經(jīng)脫蠟和水化后,對(duì)組織抗原進(jìn)行修復(fù);每張切片加2滴過(guò)氧化酶阻斷溶液,室溫下孵育10min;后加一滴正常非免疫動(dòng)物血清,室溫下孵育10min;除去血清,切片分別滴加抗AIF抗體、抗VIM抗體,4℃過(guò)夜;每張切片加一滴生物素標(biāo)記的二抗,室溫下孵育10min;然后加一滴鏈霉素菌抗生物素2過(guò)氧化物酶溶液,室溫下孵育10min(以上各步間均以PBS充分振洗);滴加新鮮配制的DAB顯色液,

4、室溫5min,PBS沖洗中止顯色反應(yīng),蘇木精襯染,逐級(jí)乙醇脫水后二甲苯透明,中性樹(shù)膠封片。
　　 應(yīng)用微波SP-免疫組化法,檢測(cè)45例骨肉瘤組織中的AIF和VIM的表達(dá)水平,根據(jù)染色強(qiáng)度及顯色腫瘤細(xì)胞比例將染色結(jié)果分為“-,+,++"3級(jí):①按切片中細(xì)胞顯色有無(wú)及深淺。評(píng)分:無(wú)顯色為0分,棕黃色為1分,棕褐色為2分。②根據(jù)顯色腫瘤細(xì)胞的比例記分:＜30%為1分;31%～71%為2分;＞71%為3分。每例腫瘤的積分=①+②,按積分

5、高低分為:0分為陰性(-),1～3分為弱陽(yáng)性(+),4～6分為強(qiáng)陽(yáng)性(++)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用X2檢驗(yàn)相關(guān)分析。
　　 結(jié)果
　　 45例骨肉瘤組織中AIF和VIM在骨肉瘤細(xì)胞中表達(dá)陽(yáng)性率分別為66.70%(30/45)和73.81%(33/45),AIF與VIM在骨軟骨瘤組織中低表達(dá);AIF和VIM在骨肉瘤組織中表達(dá)無(wú)顯著相關(guān)性(P＞0.05):AIF與VIM在骨肉瘤中的表達(dá)與性別、年齡、病程、腫瘤體積、分化程度無(wú)關(guān)(P