Tenascin-C在骨肉瘤中的表達(dá)及其意義探討.pdf

1、骨肉瘤(osteosarcoma, OS)是指腫瘤細(xì)胞能直接形成腫瘤性類骨組織或骨組織的惡性腫瘤。骨肉瘤是原發(fā)性骨惡性腫瘤中最常見者,約占骨惡性腫瘤的1/3。骨肉瘤的發(fā)病率在男性略高,可發(fā)生于各級年齡,但最多見于11~25歲,年齡越大,發(fā)病率越低。骨肉瘤多發(fā)生在骨骼生長發(fā)育的旺盛時期,其惡性程度又較高,因此是嚴(yán)重影響勞動生產(chǎn)力并危及生命的重要腫瘤之一。
　　肌糖蛋白C(TN-C)是細(xì)胞外基質(zhì)重要組成成分,在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用

2、,但其在骨肉瘤發(fā)病過程中的表達(dá)調(diào)變和作用尚不明確。因此,本課題擬探討TN-C在骨肉瘤中的表達(dá)、意義及其相關(guān)的分子調(diào)變機(jī)理。
　　目的:
　　判斷TN-C在骨肉瘤中的分布和意義。制備其特異性抗體。判斷TN-C在骨肉瘤中的分布規(guī)律,分析骨肉瘤相關(guān)生長因子EGF和IGF-1和機(jī)械張力對TN-C協(xié)同調(diào)變機(jī)理,為探索潛在的有效臨床治療提供思路。
　　方法:
　　RT-PCR法克隆TN-C cDNA,將其插入GST載體,IP

3、TG誘導(dǎo)表達(dá)并純化,常規(guī)免疫小鼠,制備單克隆抗體并利用western blot和免疫組織化學(xué)技術(shù)對進(jìn)行鑒定。利用抗體構(gòu)建檢測TN-C的夾心ELISA方法,檢測骨肉瘤患者中血清中和腫瘤組織標(biāo)本中的的TN-C表達(dá)情況。探討EGF和IGF-1和機(jī)械張力對TN-C協(xié)同促轉(zhuǎn)錄,表達(dá)及其相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。
　　結(jié)果:
　　成功克隆TN-C cDNA并表達(dá)融合蛋白。獲得3株TN-C特異性單克隆抗體,其中都能用于免疫組織化學(xué)鑒定及Weste

4、rn blot。其中2株可以用以構(gòu)建夾心ELISA方法檢測TN-C,骨肉瘤患者血清中TN-C濃度明顯高于正常對照。TN-C在骨肉瘤組織中陽性分布,主要集中于間質(zhì)中。用不同的蛋白激酶抑制劑,我們發(fā)現(xiàn)EGF和IGF-1和機(jī)械張力通過RHoA/ROCK途徑誘導(dǎo)TN-C的轉(zhuǎn)錄。同時,EGF和IGF-1也通過ERK途徑誘發(fā)TN-C的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.成功制備TN-C特異性單抗并構(gòu)建檢測其分布的夾心ELISA方法;