草茹多糖的分離純化、生物活性研究及結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、草菇（Volvariella volvacea），又名稻草菇、蘭花菇、中國(guó)蘑菇等，屬擔(dān)子菌綱、傘菌目、毒傘科、苞腳菇屬，是世界上第三大栽培食用菌。糖類(lèi)物質(zhì)是草菇主要的營(yíng)養(yǎng)成分，草菇多糖更是具有重要生理功能的活性物質(zhì)。本文主要對(duì)草菇多糖的提純工藝及生物活性進(jìn)行了研究，初步分析了多糖結(jié)構(gòu)并推測(cè)構(gòu)效關(guān)系，研究結(jié)果如下:
　　1.對(duì)草菇多糖提取工藝進(jìn)行了研究，主要探討了熱水提取法、微波輔助熱水熱水提取法和木瓜蛋白酶法工藝的優(yōu)化。通過(guò)單因素

2、和響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，確定了熱水提取草菇多糖的最優(yōu)工藝條件:料液比1∶65(g/mL)，79℃提取4.4h，反復(fù)提取1次，多糖得率為17.14％;通過(guò)單因素和正交實(shí)驗(yàn)，確定了微波輔助熱水熱水提取草菇多糖的最優(yōu)工藝條件:微波功率400W，70℃微波20 min，80℃水浴繼續(xù)提取4h，多糖平均得率為27.96％;通過(guò)單因素和均勻設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，確定了木瓜蛋白酶法提取草菇多糖的最優(yōu)工藝條件:酶添加量0.2％，pH為6.5，62℃酶解2h，實(shí)際多糖得率

3、為23.51％。對(duì)比三種提取方法的最高多糖得率，微波輔助熱水提取法優(yōu)于木瓜蛋白酶提取法優(yōu)于熱水提取法。
　　2.對(duì)草菇多糖分離純化工藝進(jìn)行了研究，主要探討了Sevag法和中性蛋白酶-Sevag法對(duì)除蛋白的影響，活性炭法和H2O2法對(duì)脫色的影響。結(jié)果表明，中性蛋白酶-Sevag法除蛋白效果較佳，酶添加量40％，45℃酶解2h后，用Sevag試劑脫蛋白2次，蛋白脫除率為92.21％，多糖保留率為78.32％;H2O2法脫色效果較好，p

4、H為9，H2O2添加量20％，60℃脫色3h，脫色率為99.45％，多糖保留率為69.12％。采用DEAE-52纖維素離子交換柱和Sephadex G-100凝膠色譜柱對(duì)草菇多糖進(jìn)行分級(jí)純化，得到VVP-1、VVP-2和VVP-3三個(gè)組分，紫外可見(jiàn)光譜掃描顯示樣品可能含蛋白。
　　3.對(duì)草菇多糖的生物活性進(jìn)行了研究，主要探究了草菇多糖體外抗氧化能力、免疫調(diào)節(jié)活性及對(duì)抑制肝癌HepG2細(xì)胞增殖的影響。體外抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，草菇多糖

5、具有較弱的DPPH·自由基、O2-·自由基清除能力和還原能力，較強(qiáng)的.OH自由基清除能力。多糖樣品清除DPPH·和·OH自由基活性順序?yàn)閂VP＞VVP-1＞VVP-2＞VVP-3;多糖樣品清除O2-·自由基及還原能力隨著濃度變化而變化，在高濃度6mg/mL時(shí)，活性大小順序?yàn)閂VP-2＞VVP-1＞VVP-3。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，草菇多糖具有體外促進(jìn)巨噬細(xì)胞和脾淋巴細(xì)胞增殖的作用，活性順序?yàn)閂VP＞VVP-1＞VVP-2＞VVP-3;還具有

6、體外抑制肝癌HepG2細(xì)胞增殖的效果，VVP-2較VVP-1、VVP-3表現(xiàn)出更強(qiáng)的活性。
　　4.對(duì)草菇多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步分析，主要通過(guò)SEM電鏡掃描、薄層層析、GC-MS、IR掃描、高碘酸氧化、NMR等手段對(duì)多糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。電鏡結(jié)果顯示VVP呈海綿狀，VVP-1呈光滑片狀，VVP-2呈樹(shù)枝狀;單糖組成分析結(jié)果表明VVP-1和VVP-2均是由阿拉伯糖、木糖、果糖、半乳糖、葡萄糖及甘露糖組成;VVP-1和VVP-2的紅外光譜圖