大黃素影響全身炎癥反應(yīng)綜合征中性粒細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、背景和目的：全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic innammatory response syndrome，SIRS)是一種全身性的非特異性炎癥反應(yīng)，過度的炎癥反應(yīng)是造成細(xì)胞、組織、臟器損害的病理基礎(chǔ)。因此，SIRS被認(rèn)為是多器官功能不全綜合癥(Multiple organ dysfunction syndrome，MODS)的前奏。中性粒細(xì)胞(p01ymorphonuclear neutrophil，PMN)是炎癥過程中重要的效應(yīng)細(xì)

2、胞，是宿主對(duì)抗感染的第一道防線，在炎癥的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸中起著關(guān)鍵的作用。正常情況下PMN以凋亡的方式被巨噬細(xì)胞清除。如果PMN凋亡延遲，不僅其作用時(shí)間延長(zhǎng)，同時(shí)分泌大量細(xì)胞因子，使炎癥反應(yīng)逐級(jí)擴(kuò)大。PMN凋亡被認(rèn)為是炎癥反應(yīng)得以無損傷收斂的一個(gè)重要機(jī)制。大黃是許多中藥組方的重要有效成分，臨床上應(yīng)用，對(duì)SIRS患者的病情有所改善，而且有研究表明大黃的有效成分大黃素(Emodin，EMD)能夠促進(jìn)SIRS患者的PMN凋亡。本文旨在研究EM

3、D對(duì)SIRS患者PMN凋亡影響的分子機(jī)制。 方法：采集SIRS患者及健康志愿者外周血，從中提取PMN并進(jìn)行體外培養(yǎng)，共分為五個(gè)實(shí)驗(yàn)組：正常組，大黃素干預(yù)正常組，SIRS組，大黃素干預(yù)SIRS組，Caspase-9抑制劑聯(lián)合大黃素干預(yù)SIRS組。各組PMN體外培養(yǎng)24h后，用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)不同處理組中性粒細(xì)胞凋亡的情況；采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各組中凋亡調(diào)控基因Bax/Bcl-xL mRNA水平的差異；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)各

4、組Bax/Bcl-xL蛋白水平的差異。 結(jié)果：①應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)發(fā)現(xiàn)：SIRS患者外周血PMN凋亡百分率明顯低于健康志愿者(16.36±4.56 vs 62.89±9.41，P<0.051；大黃素對(duì)健康志愿者外周血PMN凋亡百分率無顯著影響(62.89±9.41 vs 67.15±7.57，P>0.05)；然而，SIRS患者中，大黃素干預(yù)組與對(duì)照組相比，PMN凋亡百分率明顯增加(29.12±9.67 vs 16.36±4.56，

5、P<0.05)：大黃素與Caspase-9抑制劑聯(lián)合作用組較大黃素干預(yù)組PMN凋亡百分率明顯下降(16.43±8.22 vs 29.12±9.67，P<0.05)。②與健康志愿者相比，SIRS患者PMN的促凋亡基因Bax的表達(dá)無明顯差異(mRNA水平：1.13±0.08 vs1.28±0.13，P>0.05；蛋白水平：62.5﹪vs 80.0﹪，P>0.05)；然而，抑凋亡基因Bcl-xL的表達(dá)較健康志愿者顯著增加(mRNA水平：0.9

6、8±0.12vs 0.32±0.07，P<0.05；蛋白水平：87.5﹪vs 20.0﹪，P<0.05)；在SIRS患者中，大黃素干預(yù)組與對(duì)照組相比，PMN的Bax表達(dá)無明顯差異fmRNA水平：1.19±0.11 vs 1.13±0.08，P>0.05；蛋白水平：87.5﹪vs62.5﹪，P>0.051；而兩組之間Bcl-xL的表達(dá)具有顯著差異性(mRNA水平：0.39±0.06 vs 0.98±0.12，P<0.05；蛋白水平：25.