亞低溫對大鼠全身炎癥反應(yīng)綜合征影響的實驗研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文亞低溫對大鼠全身炎癥反應(yīng)綜合征影響的實驗研究姓名：張趣申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：劉春峰2001.4.1材料與方法1、動物模型60只Wistar大鼠予3％戊巴比妥40mg／kg腹腔注射麻醉生效后，隨機分為正常對照組、內(nèi)毒素組和亞低溫組。內(nèi)毒素組和亞低溫組腹腔注射內(nèi)毒素(20mg／kg)制成大鼠SIRS的動物模型。正常對照組腹腔注射等量生理鹽水。亞低溫組注射內(nèi)毒素后立即給予亞低溫干預(yù)，向動物全身噴灑涼水

2、(4℃)，將多導(dǎo)生理記錄儀肛溫探針插人大鼠直腸中持續(xù)監(jiān)測肛溫，再通過調(diào)節(jié)室溫，輔以電熱毯和加熱燈，監(jiān)測亞低溫組動物肛溫維持于32330C之間。2、標本采集和處理各組于實驗1、2和3小時各取6只動物于無菌條件下取材，肺組織置于去RNA酶的Eppendoff管中一80℃凍存，待測TNF—OtmRNA。實驗3小時各組取8只動物剖開腹腔肝組織取材液氮中保存，待測腺苷酸及乳酸的含量。于剖腹前球后V叢取血lml，分離血清凍存，待測血清酶。同時留取肺

3、及肝組織置于25％戊二醛及二甲砷酸緩沖液中固定，進行透射電鏡觀察。3、實驗方法(1)應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄暴合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)方法研究TNF—d在SIRS大鼠肺組織分子水平的表達：用TRIZOL總RNA提取試劑提取肺組織mRNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA的第一鏈，再經(jīng)凝膠電泳成像及分析系統(tǒng)掃描PCR擴增產(chǎn)物，以B—action內(nèi)參照標化TNF—n含量。(2)利用全自動生化分析儀生化方法檢測血清酶AI衛(wèi)、AST、ASP、LDH、CK各項指標的變化。