陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥患者CD34+CD59+細(xì)胞體外擴(kuò)增及裸鼠移植的研究.pdf

1、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)是一種后天獲得性慢性溶血性疾病,以反復(fù)的血管內(nèi)溶血、慢性貧血及血栓形成為主要臨床特征.PNH的一個顯著特點(diǎn)是患者體內(nèi)異?？寺∨c正常造血細(xì)胞長期共存,但機(jī)制并不十分清楚.另外,PNH目前仍無有效的根治方法.PNH正常克隆是否真正正常?能否在自體干細(xì)胞移植時重建造血?本文針對這些問題進(jìn)行了研究,其結(jié)果將為開展新的治療(自體干細(xì)胞移植)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).本文首先研究了利用細(xì)胞因子組合進(jìn)行正常人骨髓造血干/祖細(xì)胞擴(kuò)

2、增,將擴(kuò)增后的細(xì)胞移植給接受亞致死劑量照射的裸鼠,觀察移植后裸鼠體內(nèi)人造血干細(xì)胞的表達(dá)以及多向分化的情況,建立可靠的移植模型.在此基礎(chǔ)上,我們將PNH患者體內(nèi)正常造血干/祖細(xì)胞(CD34+CD59+)分離出來,進(jìn)行體外擴(kuò)增后輸注給接受亞致死劑量照射的BALB/c裸鼠來研究其增殖能力以及重建造血的情況,并且將PNH患者CD34+CD59+細(xì)胞與正常人CD34+細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)表達(dá)情況進(jìn)行比較研究,以期為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).本研究首先利用免

3、疫磁珠方法分選出正常人CD34+細(xì)胞,并在細(xì)胞因子組合SCF+IL-3+IL-6+TPO+EPO+FLT-3作用下進(jìn)行體外擴(kuò)增,最適宜擴(kuò)增時間為第7天,在此條件下擴(kuò)增倍數(shù)為57.38±2.50倍.進(jìn)一步利用免疫磁珠雙陽性分選法分選出PNH患者CD34+CD59+細(xì)胞,將其與正常人CD34+細(xì)胞的擴(kuò)增過程以及擴(kuò)增后的干/祖細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的表達(dá)情況進(jìn)行比較,結(jié)果顯示:(1)PNH患者的CD34+CD59+細(xì)胞可以在裸鼠體內(nèi)成功存活.(2)接