陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥患者骨髓細(xì)胞PIG-A基因突變形式及EGR-1、WT1基因表達(dá)水平研究.pdf

1、目的:了解陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)患者PIG-A基因突變形式及EGR-1基因(early growth response gene)、WT1基因(Wilms,tumor gene)mRNA表達(dá)水平,探討中國PNH患者PIG-A基因突變特點及PNH克隆獲得增殖優(yōu)勢的機(jī)制。
　　 方法:研究對象為20例,其中PNH患者16例,AA-PNH綜合征患者4例

2、,正常對照10例。采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測PNH患者及AA-PNH綜合征患者外周血及骨髓CD55-及CD59-細(xì)胞的比例,并分選出CD59-的骨髓單個核細(xì)胞(BMMNCS)。應(yīng)用DNA測序法檢測PIG-A基因突變的形式；RT-PCR方法檢測CD59+BMMNC及CD59-BMMNC WT1基因及EGR-1基因mRNA的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.對16例PNH患者中的9例和4例AA-PNH患者中的1例進(jìn)行了B

3、MMNCPIG-A基因突變形式的檢測,共發(fā)現(xiàn)了5種突變形式,均為堿基置換,包括鳥嘌呤替代腺嘌呤,胸腺嘧啶替代鳥嘌呤,胸腺嘧啶替代腺嘌呤,鳥嘌呤替代胸腺嘧啶,胞嘧啶替代鳥嘌呤,其中1例為同義突變,余為錯義突變。其中有3例PNH患者同時存在2個以上的點突變,未發(fā)現(xiàn)插入或者缺失突變形式。對上述結(jié)果進(jìn)行了突變形式的陽性率分析,G替代A的陽性率為30.0％(3/10),T替代G的陽性率為20.0％(2/10),T替代A的陽性率為10.O％(1/1

4、0),G替代T的陽性率為10.0％(1/10),C替代G的陽性率為10.0％(1/10)。我們所研究的10例患者,BMMNC PIG.A基因有突變患者的CD59。細(xì)胞數(shù)量高于沒有突變者,且突變形式為G替代A的CD59-細(xì)胞數(shù)量高于其他突變的形式。
　　 2.PNH及AA-PNH患者CD59-細(xì)胞組、CD59+細(xì)胞組及正常對照組EGR-1mRNA的相對表達(dá)量分別為(1.00±0.11)、(0.86±0.14)和(0.85±0.06

5、),CD59-細(xì)胞組明顯高于CD59+細(xì)胞組和正常對照組(p均<0.05),而CD59+細(xì)胞組和正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)；PNH及AA-PNH患者CD59-細(xì)胞組、CD59+細(xì)胞組及正常對照組WT1 mRNA的相對表達(dá)量分別為(1.06±0.16)、(0.90±0.14)和(0.85±0.06),CD59-細(xì)胞組明顯高于CD59+細(xì)胞組和正常對照組(p均<0.05),而CD59+細(xì)胞組和正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意