細粒棘球蚴重組抗原Eg10和mMDH致樹突狀細胞免疫耐受的機制研究.pdf

1、目的：
　　初步明確細粒棘球蚴重組抗原Eg10和mMDH免疫小鼠產生的免疫耐受機制。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)小鼠骨髓來源的樹突狀細胞（Dendritic cell，DC），用Eg10和mMDH體外刺激DCs，通過掃描電鏡觀察DCs的形態(tài)變化，細胞免疫熒光觀察DCs表達吲哚胺2,3雙加氧酶（Indoleamine2,3-dioxygenase，IDO）的水平；
　　2.利用IDO抑制劑1-甲基色氨酸（1-Me

2、thyl-tryptophan，1-MT）處理DCs3h，用來抑制IDO的表達及酶活性，然后用重組抗原Eg10和mMDH體外刺激DCs，通過混合淋巴細胞反應檢測DCs刺激CD4+T細胞增殖及誘導CD4+CD25+FOXP3+調節(jié)性T細胞（Regulatory T cell，Treg）生成的能力；Q-PCR檢測DCs中多種細胞因子的表達；流式細胞術(FCM)檢測DC表面分子CD80/CD86、MHCII、CD40的表達情況。
　　結

3、果：
　　1.重組抗原Eg10和mMDH不能刺激DCs表面樹突的生成，DCs呈現不成熟狀態(tài)；
　　2.重組抗原Eg10和mMDH刺激DCs后，IDO的表達增強，上清中犬尿氨酸的含量也升高，且1-MT能特異性降低IDO的表達水平和酶活性；
　　3.與1-MT未處理的mMDH組相比，1-MT處理的mMDH組中DCs刺激CD4+T細胞增殖的能力升高，誘導CD4+CD25+FOXP3+Tregs生成的能力降低，差異有統計學意義

4、；而Eg10組對1-MT的反應不明顯；
　　4.重組抗原Eg10和mMDH刺激DCs后，TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA水平的表達呈不同程度的升高，1-MT處理的抗原組TNF-αmRNA表達升高，IL-6、IL-10 mRNA表達降低；
　　5.重組抗原Eg10和mMDH刺激DCs后，細胞表面分子的表達水平較低，1-MT處理并不能提高表面分子的表達水平。
　　結論：
　　1.細粒棘球蚴重組抗原Eg10和