樹突狀細胞分泌的exosomes誘導(dǎo)免疫耐受功能的初步研究.pdf

1、樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)是唯一可以誘導(dǎo)初始型T細胞(naive T cell)活化的專職抗原遞呈細胞(APC)，未成熟DCs(iDCs)能夠維持外周耐受，而成熟DCs(mDCs)能夠刺激效應(yīng)性T細胞。DCs能分泌一種直徑約為30-100 nm的微小膜囊泡體(exosomes)，稱Dex，表達一些與DCs功能相關(guān)的分子，如MHC-Ⅰ、Ⅱ類分子、共刺激分子B7以及黏附分子CD54等，Dcx的功能取決于其來源細胞類

2、型及其成熟的狀態(tài)。 為了探討樹突狀細胞(DCs)分泌的exosomes(Dex)誘導(dǎo)T細胞免疫耐受作用，研究供體Dex降低同種異體移植排斥的可能性。體外誘導(dǎo)和培養(yǎng)正常人外周血單個核細胞來源的iDCs，并負載其自身凍融抗原，用lipopolysaccharide(LPS)促其成熟，流式檢測iDCs和mDCs的表型；采用超速離心和超濾的方法分離純化iDCs分泌的Dex(iDex)和mDCs分泌的Dex(mDex)；以混合淋巴細胞反應(yīng)

3、(MLR)作為同種異體移植體外模型，CCK-8法比較iDex和mDex的生物學(xué)功能。 結(jié)果顯示，異源的iDex在iDCs存在時能夠抑制MLR中T細胞增殖反應(yīng)，而異源的mDex在mDCs存在時則增強MLR中T細胞增殖反應(yīng)。因此mDCs來源的mDex，能夠活化T細胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答，在抗腫瘤免疫治療中具有誘人的前景；相反iDCs來源的iDex可以誘導(dǎo)外周免疫耐受，在同種異體移植耐受中起重要作用，將成為防止移植排斥反應(yīng)以及治療自身免疫性疾

4、病的一種新方法。 同時，為了進一步研究調(diào)節(jié)性DCs分泌的rDex誘導(dǎo)的免疫耐受作用途徑和分子機制，為抗腫瘤，預(yù)防移植排斥，治療自身免疫性疾病等臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)，用TGF-B1聯(lián)合IL-10誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性DCs，流式細胞儀檢測調(diào)節(jié)性DCs和正常DCs的表面標志及吞噬功能，并用Bradford法檢測它們分泌Dex的能力；Western-Blot方法檢測并比較iDCs分泌的Dex(iDex)與調(diào)節(jié)性DCs分泌的Dex(rDex)表達的

5、相關(guān)分子；通過CCK-8法分析異源iDex和rDex在MLR中抑制T細胞增殖作用的效果，比較rDex與iDex誘導(dǎo)免疫耐受的能力。結(jié)果顯示，TGF-B1和IL-10可下調(diào)DCs表面的共刺激分子CD80、CD83、CD86的表達，并誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性DCs分泌更多的rDex；rDex抑制T細胞增殖作用顯著強于iDex；rDex表達更多的FasL，提示TGF-81和IL-10誘導(dǎo)的調(diào)節(jié)性DCs分泌的rDex在免疫耐受中發(fā)揮重要作用，有望應(yīng)用于同種異