人多發(fā)性骨髓瘤模型的建立及特性研究.pdf

1、多發(fā)性骨髓瘤(MM)是一種漿細胞惡性增殖性疾病，其特點是惡性漿細胞在骨髓微環(huán)境中不規(guī)則積聚引起的不同程度貧血、骨破壞、腎功能不全、高鈣血癥和感染。盡管MM在我國發(fā)病率不高，但其發(fā)病機制尚不明確，目前仍被認為是不可治愈的疾病，故對人類健康仍有較大危害。因此為了更好的研究和探索MM的病理過程、研發(fā)試驗新的抗骨髓瘤藥物，建立完善的MM模型具有重大意義。 臨床上的骨移植常常用于修補缺損支持整形或是修復(fù)缺陷的骨連接，在骨傷外科、頭頸頜面外

2、科、腦外科、口腔科甚至美容整形科具有著廣泛的應(yīng)用。骨移植常用自體骨移植和同種異體骨移植，罕有應(yīng)用異種骨移植者。但利用異種骨移植建立鼠一人嵌合體對研究人血液系統(tǒng)生理及病理過程具有重大意義。 目前可利用的人類漿細胞腫瘤模型大致可劃分為兩大類：重復(fù)再現(xiàn)模型和移植模型。盡管沒有哪一種經(jīng)過遺傳學(xué)工程孵育的動物種系能夠重現(xiàn)某種人漿細胞腫瘤的全部特性，但有些種系的動物已經(jīng)可以作為一種比較理想的平臺，來對人類漿細胞腫瘤信號傳導(dǎo)途徑中的改變(如I

3、L-6、Ab1、Myc等)進行機制性和治療性研究，而且這些模型在臨床前藥物實驗等其他用途中具有著高度的價值。 近年來Yaccoby等人曾建立起較經(jīng)典的SCID-huMM模型，能夠較完善的模擬MM病程中出現(xiàn)的多種病理表現(xiàn)和臨床癥狀。該模型實際上建立了一種鼠—人嵌合性小生境。這種小生境具有著非常復(fù)雜的特性。移植骨組織的成活很可能涉及到小生境中的多種復(fù)雜過程。既往的模型研究都是基于聯(lián)合免疫缺陷(SCID)小鼠來構(gòu)建，這種小鼠雖然不易引

4、起免疫排斥反應(yīng)，但是卻忽略了MM是在有免疫力的人體發(fā)生的，因此利用無免疫功能的SCID小鼠建立的MM模型具有較大局限性。 在異種骨移植基礎(chǔ)上，本研究采用與SCID-hu模型相似的方法，在一種嶄新的BALB/c-nu-hu鼠—人嵌合性小生境基礎(chǔ)上建立新型的多發(fā)性骨髓瘤模型并對其特性進行較為深入的研究。 目的：建立新的多發(fā)性骨髓瘤模型，并其與經(jīng)典模型的特性對比。 方法：采用4月齡人女性胎兒，分離股骨和脛骨，取約1cm

5、胎骨植入BALB/c裸鼠皮下；移植前后收集人胎骨髓組織細胞行AnnexinV/PI雙標記，分別使用流式細胞術(shù)和熒光顯微鏡檢測與觀察細胞的凋亡；并于胎骨移植前后進行骨髓細胞學(xué)及組織學(xué)分析。再在BALB/c-nu-hu鼠—人嵌合體基礎(chǔ)上將原發(fā)性多發(fā)性骨髓瘤病人的骨髓單個核細胞懸液注入胎骨內(nèi)建立模型；抗人IgG的ELISA試劑盒檢測裸鼠體內(nèi)血清人IgG水平；胎骨及裸鼠重要組織分別做H&E染色病理鏡檢與CD34、CD59和CD138免疫組織化學(xué)

6、染色及鏡檢，胎骨及裸鼠長骨行TRAP免疫組織化學(xué)染色鏡檢；模型裸鼠行前后X線平片對比拍照。 結(jié)果：人胎骨可以在BALB/c裸鼠皮下存活，且具有高度活性；胎骨植入前后骨髓細胞形態(tài)及數(shù)量沒有明顯差別。原發(fā)性多發(fā)性骨髓瘤病人的瘤細胞能在經(jīng)人胎骨植入的裸鼠體內(nèi)生長、浸潤、播散；模型裸鼠出現(xiàn)惡病質(zhì)、特異性的高人IgG水平、進展性骨破壞、終末人骨髓瘤細胞浸潤播散。 結(jié)論：成功建立嶄新的BALB/c-nu-hu鼠一人嵌合性小生境，可作