BAMBI在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá).pdf

1、肺癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，也是全球惡性腫瘤致死的首要因素。據(jù)報(bào)道，目前我國肺癌發(fā)病率每年增長26.9％。因此，加強(qiáng)以肺癌分子生物學(xué)等領(lǐng)域?yàn)榛A(chǔ)的肺癌病因?qū)W研究，從而探討其發(fā)病機(jī)理及治療方法具有極其重要的意義。 BAMBI基因定位在10號(hào)染色體p12.3-p11.2區(qū)域，編碼產(chǎn)物為一個(gè)由260個(gè)氨基酸組成的跨膜糖蛋白，分子量29108道爾頓，又稱作偽受體(pseudoreceptor)、NMA屬于BAMBI家族。該家族成員與

2、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)、激活素(activin)等配體的Ⅰ型受體胞外區(qū)都具有相似的結(jié)構(gòu)。因此BAMBI能夠整合到配體-受體復(fù)合物中，并與TGF-βⅡ型受體形成聚合物，但由于它不具有TGF-βⅠ型受體所特有的絲氨酸/蘇氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，所以不能磷酸化胞漿內(nèi)的Smad蛋白，從而在受體水平上阻滯TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。有研究表明，對(duì)于肺癌等上皮組織來源的腫瘤而言，TGF-β可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，而BAMBI在TG

3、F-β信號(hào)通路中的負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制對(duì)肺癌的作用目前尚不清楚。另外，據(jù)報(bào)道BAMBI在人結(jié)腸癌、肝癌中均存在表達(dá)上調(diào)，但在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)尚未明確。 目的: 檢測(cè)BAMBI在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織中的表達(dá)情況，探討其與NSCLC臨床病理因素之間的關(guān)系；同時(shí)觀察BAMBI在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中的表達(dá)分布情況，并探討其表達(dá)與NSCLC病理分型及侵襲潛能之間的關(guān)系。 實(shí)驗(yàn)材料與方法: 一、非小細(xì)胞肺癌組織及

4、細(xì)胞系63例NSCLC及癌旁正常組織標(biāo)本用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)。其中31例新鮮肺癌組織及癌旁正常肺組織標(biāo)本，術(shù)后立即投入液氮速凍之后，于-70℃保存，用于RT—PCR檢測(cè)。三株NSCLC細(xì)胞系包括人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、人肺巨細(xì)胞癌高侵襲潛能的亞系BEl以及人肺巨細(xì)胞癌低侵襲潛能的亞系LH7用于免疫熒光技術(shù)、RT—PCR以及Westem blot檢測(cè)。 二、半定量RT-PCR用RNAout提取總RNA，合成BAMBI、GAPDH引

5、物，應(yīng)用兩步法RT-PCR試劑盒合成cDNA鏈，然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增。產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳，用自動(dòng)電泳凝膠成像分析系統(tǒng)采集圖像，測(cè)定條帶積分光密度值。 三、免疫組織化學(xué)染色組織經(jīng)多聚甲醛固定，制成石蠟切片進(jìn)行免疫組化SP法染色，一抗1∶200稀釋，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片。用顯微鏡觀察采集圖像。 四、細(xì)胞培養(yǎng) A549細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基；BEl及LH7細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血

6、清的RPMI1640培養(yǎng)基。所有細(xì)胞都在37℃、5％CO<,2>條件下孵育。 五、Western blot檢測(cè)離心收集細(xì)胞，加入適量裂解液，離心取上清。蛋白定量后電泳、轉(zhuǎn)膜，封閉后加入一抗(1∶1000)4℃過夜。次日加入二抗(1∶10000)常溫2h，加入ECL試劑暗室曝光，用自動(dòng)電泳凝膠成像分析系統(tǒng)采集圖像，測(cè)定條帶積分光密度值。 六、免疫細(xì)胞熒光染色細(xì)胞爬片，用多聚甲醛固定，封閉后加入一抗(1：200)4℃過夜，次