利用半夏凝集素構(gòu)建內(nèi)生工程菌及其抗同翅目害蟲(chóng)效果研究.pdf

1、本研究對(duì)水稻和油菜進(jìn)行內(nèi)生菌的分離,各自分離到了66和63株細(xì)菌,其中桿菌、革蘭氏陽(yáng)性菌,有芽胞的占優(yōu)勢(shì)。SJ-10和YY-23分別為水稻和油菜內(nèi)生菌,經(jīng)生理生化、16SrRNA序列鑒定及構(gòu)建16SrRNA系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù),YY-23鑒定為蘇云金芽胞桿菌,SJ-10屬于腸桿菌屬。WB800為枯草芽胞桿菌。以灌根,浸種及接種無(wú)菌苗等方法回接水稻和油菜,定殖回收結(jié)果表明SJ-10、WB800和YY-23能在水稻和油菜體內(nèi)長(zhǎng)期定殖。且三株菌均可在小

2、麥、玉米、油菜、紅菜苔、蘿卜等多種植物體內(nèi)定殖,SJ-10和WB800在三個(gè)月后仍可以從上述植物中分離到,YY-23在兩個(gè)月后可以分離到。菌液浸種24h后播種,20天后,經(jīng)SJ-10浸種后油菜鮮重比對(duì)照增加了52.5％,經(jīng)YY-23浸種后油菜的鮮重比對(duì)照增加了113.5％。經(jīng)WB800浸種30天后水稻的鮮重比對(duì)照增加了62.16％。
　　 利用半夏凝集素(PTA)構(gòu)建分泌表達(dá)穿梭載體,轉(zhuǎn)入水稻內(nèi)生菌SJ-10和WB800中,進(jìn)行

3、SDS-PAGE及Western Bloting分析,SJ-10轉(zhuǎn)化子的菌體蛋白和WB800轉(zhuǎn)化子上清的中可以檢測(cè)到PTA,兩菌進(jìn)行抗蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果表明PTA可以明顯的抑制白背飛虱的群體增長(zhǎng)量。19天時(shí)群體數(shù)量達(dá)到最大值,此時(shí)對(duì)照的白背飛虱的群體數(shù)量是SJ-10-PTA的3.38倍,是WB800-PTA的98.7倍。到26天時(shí)CK與WB800-PTA自背飛虱的數(shù)量降為0,且CK和SJ-10試驗(yàn)苗在此時(shí)全部死亡。WB800、SJ-10-P

4、TA與WB800-PTA試驗(yàn)苗生長(zhǎng)正常。
　　 將內(nèi)生菌SJ-10和YY-23添加到人工營(yíng)養(yǎng)液中飼喂棉蚜,SJ-10在飼喂第6天時(shí)存活率比對(duì)照明顯降低,差異顯著(P<0.05),而YY-23無(wú)抗蟲(chóng)活性。
　　 上述結(jié)果表明三株內(nèi)生菌能穩(wěn)定在植物體內(nèi)定殖,并具有促生長(zhǎng)作用,重組菌SJ-10和WB800有明顯的抗白背飛虱活性,野生菌SJ-10同時(shí)具有一定的抗蚜蟲(chóng)活性。因此植物內(nèi)生菌可作為宿主菌,表達(dá)抗蟲(chóng)蛋白,用于抗刺吸式口器