水稻內生細菌的研究及其殺蟲工程菌的構建.pdf

1、四川農業(yè)大學碩士學位論文水稻內生細菌的研究及其殺蟲工程菌的構建姓名：孫惠青申請學位級別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種學指導教師：李平20030501水稻內生細菌的研究及其殺蟲工程菌的構建摘要本研究從四川主要栽培水稻品種D優(yōu)527體內共分離到102株細菌。研究了內生細菌在水稻植株內不同生育期、不同組織部位的動態(tài)分布曲線特點，確定編號為sR一15、sR25、sL37的三株細菌為優(yōu)勢菌株，并進行了優(yōu)勢菌株的回接、定殖試驗，驗證其內生性。經生理、生化

2、特性結合形態(tài)學的研究，確定了優(yōu)勢內生菌株在微生物學上的分類地位，并進行了與Bt殺蟲蛋白基因的重組，以及殺蟲蛋白基因的表達及對水稻二化螟防治研究，驗證了優(yōu)勢內生細菌作為生防工程載體菌的可行性。此外，對菌株的致病性、促生性等生物學特性進行研究。取得的主要結果如下l利用改進的細菌分離技術，從健康栽培水稻品種D優(yōu)527的植株體內共分離到102株細菌，從根系中分離到41株，從葉片分離到37株，從莖分離到24株。其中，革蘭氏陽性細菌77株，革蘭氏陰

3、性細菌25株。利用ERIC—PCR技術對菌株基因組進行分析，結果顯示，菌株基因組間存在多態(tài)性。2對所獲得菌株進行種群、數量的動態(tài)分析，研究細菌在根、莖、葉內隨水稻生育期變化的動態(tài)分布情況，其中，水稻分蘗期和孕穗期是細菌種群數量分布的高峰時期。3根據種群分布特點，初步確定SR一15、sR25、SL37為優(yōu)勢種群，而SR一15優(yōu)勢性尤為明顯，并確定了SR15、SR25、SL37菌株在不同生育期數量動態(tài)變化趨勢，其中，s艮15在分蘗期和孕穗期

4、數量分布高于其它兩菌株。4對SR—15、SR一25、SL37菌株的生物學特性進行研究，結果顯示，菌株的生長均符合細菌生長的典型的生長曲線，在不同pH、溫度、培養(yǎng)基條件下，菌株生長的動態(tài)變化各有差異，且與相關報道的內生細菌生長特性具有一定的相似性。5轉pucl8標記驗證內生性試驗結果表明，在不同電壓下，電擊轉化細菌的效率不同，在電壓為1500V時轉化效率最高，而pucl8使用量對轉化效率影響不明顯。轉帶抗生素標記的pucl8于優(yōu)勢細菌，回