水稻內(nèi)生細菌的研究及其殺蟲工程菌的構(gòu)建.pdf

1、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文水稻內(nèi)生細菌的研究及其殺蟲工程菌的構(gòu)建姓名：孫惠青申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種學(xué)指導(dǎo)教師：李平20030501水稻內(nèi)生細菌的研究及其殺蟲工程菌的構(gòu)建摘要本研究從四川主要栽培水稻品種D優(yōu)527體內(nèi)共分離到102株細菌。研究了內(nèi)生細菌在水稻植株內(nèi)不同生育期、不同組織部位的動態(tài)分布曲線特點，確定編號為sR一15、sR25、sL37的三株細菌為優(yōu)勢菌株，并進行了優(yōu)勢菌株的回接、定殖試驗，驗證其內(nèi)生性。經(jīng)生理、生化

2、特性結(jié)合形態(tài)學(xué)的研究，確定了優(yōu)勢內(nèi)生菌株在微生物學(xué)上的分類地位，并進行了與Bt殺蟲蛋白基因的重組，以及殺蟲蛋白基因的表達及對水稻二化螟防治研究，驗證了優(yōu)勢內(nèi)生細菌作為生防工程載體菌的可行性。此外，對菌株的致病性、促生性等生物學(xué)特性進行研究。取得的主要結(jié)果如下l利用改進的細菌分離技術(shù)，從健康栽培水稻品種D優(yōu)527的植株體內(nèi)共分離到102株細菌，從根系中分離到41株，從葉片分離到37株，從莖分離到24株。其中，革蘭氏陽性細菌77株，革蘭氏陰

3、性細菌25株。利用ERIC—PCR技術(shù)對菌株基因組進行分析，結(jié)果顯示，菌株基因組間存在多態(tài)性。2對所獲得菌株進行種群、數(shù)量的動態(tài)分析，研究細菌在根、莖、葉內(nèi)隨水稻生育期變化的動態(tài)分布情況，其中，水稻分蘗期和孕穗期是細菌種群數(shù)量分布的高峰時期。3根據(jù)種群分布特點，初步確定SR一15、sR25、SL37為優(yōu)勢種群，而SR一15優(yōu)勢性尤為明顯，并確定了SR15、SR25、SL37菌株在不同生育期數(shù)量動態(tài)變化趨勢，其中，s艮15在分蘗期和孕穗期

4、數(shù)量分布高于其它兩菌株。4對SR—15、SR一25、SL37菌株的生物學(xué)特性進行研究，結(jié)果顯示，菌株的生長均符合細菌生長的典型的生長曲線，在不同pH、溫度、培養(yǎng)基條件下，菌株生長的動態(tài)變化各有差異，且與相關(guān)報道的內(nèi)生細菌生長特性具有一定的相似性。5轉(zhuǎn)pucl8標記驗證內(nèi)生性試驗結(jié)果表明，在不同電壓下，電擊轉(zhuǎn)化細菌的效率不同，在電壓為1500V時轉(zhuǎn)化效率最高，而pucl8使用量對轉(zhuǎn)化效率影響不明顯。轉(zhuǎn)帶抗生素標記的pucl8于優(yōu)勢細菌，回