構建防病、殺蟲及具有內(nèi)生定殖能力的多功能工程菌的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究將含有v ip3A殺蟲基因的蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)和具有內(nèi)生及防病等優(yōu)良特性的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)進行原生質(zhì)體融合,希望得到具有雙親優(yōu)良特性于一體的工程菌.通過篩選最終得到一株具有殺蟲、防病及內(nèi)生性均較強的多功能融合子.該研究包括以下四部分:一、對BS-2和WB7菌株進行誘導抗性和拮抗作用測定;二、測定親本菌株原生質(zhì)體形成和再生的酶解條件;三、在PEG6000和

2、Ca+2存在下進行原生質(zhì)體融合及可穩(wěn)定遺傳融合子的篩選;四、穩(wěn)定遺傳融合子的生物學特性的測定.通過傳代實驗檢查發(fā)現(xiàn),誘導后的親本菌株均有穩(wěn)定的抗藥性,同時誘導后的親本菌株對黃瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)的拮抗作用測定表明:未誘導的親本菌株BS-2及其誘導的抗利福平菌株均具有很強的抗菌能力,誘導后其抗菌作用和菌落形態(tài)沒有改變;而菌株WB7在誘導前對黃瓜枯萎病菌有微弱的拮抗作用,誘導的

3、抗卡那霉素菌株則不表現(xiàn)拮抗作用.同時還將誘導前后BS-2和WB7菌株的拮抗作用進行對比,結果顯示它們對黃瓜枯萎病菌的拮抗作用差異很明顯.原生質(zhì)體最佳制備條件因菌株不同而有很大的區(qū)別,試驗結果表明,親本菌株的原生質(zhì)體形成率隨酶解濃度和酶解時間的延長而增加,但再生率卻下降.綜合以上的情況,為了達到最佳的酶解和再生率,該實驗將WB7kan和BS-2rif的酶解濃度分別定為0.76mg/ml和1.15mg/ml,在這種酶解條件下WB7kan的原

4、生質(zhì)體形成和再生率分別為95.5%和11.3%,而BS-2rif的為96.77%和10.5%.在PEG6000存在下進行親本原生質(zhì)體融合,在雙抗培養(yǎng)基中篩選得到了97株融合子,將它們在雙抗培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)后,得到了11株可以在雙抗培養(yǎng)基中穩(wěn)定遺傳的融合子,11株融合子對黃瓜枯萎病菌拮抗作用測定表明,其中只有6株具有較強拮抗作用的融合子.經(jīng)對這6株可穩(wěn)定遺傳的融合子對小菜蛾殺蟲活性的測定和vip3A基因的PCR檢測后,得到了3株具有殺蟲活

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