強的松在土三七誘導的肝竇阻塞綜合征中的治療作用及其機制探討.pdf

1、第一章土三七誘導小鼠HSOS模型的建立與評價
　　目的:采用PBS、野百合堿、環(huán)磷酰胺、嗎替麥考酚酯、云南三七、土三七小鼠灌胃法,比較各組小鼠HSOS發(fā)生率,以求成功構(gòu)建穩(wěn)定可復制的HSOS建模方法,并給予綜合評價。
　　方法:160只清潔級健康雌性昆明小鼠隨機分為六組:PBS正常對照組、野百合堿組、環(huán)磷酰胺組、嗎替麥考酚酯組、云南三七組和土三七組。分別予以野百合堿灌胃7天,環(huán)磷酰胺隔日灌胃30天,PBS、嗎替麥考酚酯、云南

2、三七、土三七灌胃30天后處死小鼠。檢測血液中血細胞計數(shù)、肝功能情況;測肝重/體重;留取肝組織行HE染色、Masson染色,用修改后的Deleve評分標準進行病理學評分。
　　結(jié)果:
　　1.野百合堿組、環(huán)磷酰胺組和土三七組分別有23只、5只和24只小鼠成模,PBS正常對照組、云南三七組和MMF組小鼠未誘導出HSOS。
　　2.與PBS正常對照組比較,野百合堿組及土三七組小鼠體重有增加(P＜0.05),其中以土三七組小鼠

3、體重增加更為明顯;環(huán)磷酰胺組小鼠體重明顯下降(P＜0.05);而MMF組和云南三七組小鼠體重與PBS正常對照組無明顯差異(P＞0.05)。
　　3.與PBS正常對照組對比,野百合堿組和土三七組小鼠血細胞中RBC及PLT計數(shù)下降,WBC計數(shù)增加(P＜0.05);云南三七組RBC計數(shù)稍有增加,WBC和PLT計數(shù)稍有減少,但差異并無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);環(huán)磷酰胺組和MMF組小鼠均出現(xiàn)三系減少,且以環(huán)磷酰胺組減少得更為明顯(P＜0.

4、05)。
　　4.與PBS正常對照組比較,各模型組小鼠肝指數(shù)、ALT、AST、TBIL均明顯升高,ALB明顯下降(P＜0.05);MMF組小鼠肝功能較PBS正常對照組亦存在一定程度損害,但明顯輕于環(huán)磷酰胺組(P＜0.05):云南三七組小鼠肝功能變化情況與正常對照PBS正常對照組比較無明顯差異(P＞0.05)。
　　5.根據(jù)修改后的Deleve評分標準,野百合堿組小鼠多為輕-中度HSOS改變,土三七組及環(huán)磷酰胺組小鼠多表現(xiàn)為中

5、-重度HSOS。
　　結(jié)論:
　　1.野百合堿、環(huán)磷酰胺、土三七均能成功誘導小鼠HSOS模型,其中環(huán)磷酰胺法成模率低于野百合堿和土三七灌胃法,云南三七和MMF未能成功誘導出小鼠HSOS模型。
　　2.野百合堿、土三七誘導的小鼠HSOS模型均符合人類HSOS病理改變,其中野百合堿可誘導急性HSOS模型,土三七可誘導慢性HSOS模型,為HSOS的進一步研究提供了理想動物模型。
　　3.與野百合堿比較,土三七誘導的HS

6、OS動物模型在進行藥物建模機制、藥物干預研究方面更為理想。
　　4.與土三七比較,云南三七未能成功誘導出小鼠HSOS模型,說明云南三七無明顯肝毒性,臨床用藥相對安全。
　　5.與環(huán)磷酰胺比較,嗎替麥考酚酯的骨髓抑制及肝毒性均較輕,是相對安全的免疫抑制劑。
　　第二章強的松對土三七誘導HSOS的防治療效觀察
　　目的:探討不同劑量強的松對土三七誘導小鼠HSOS的防治作用。
　　方法:115只清潔級健康雌性昆明

7、小鼠隨機分為四組:PBS正常對照組、土三七組、低劑量強的松干預組(5mg·kg-1·d-1)和高劑量強的松干預組(10mg·kg-1·d-1)分別灌胃30天后處死小鼠。檢測血液中血細胞計數(shù)、肝功能情況;測肝重/體重;留取肝組織行HE染色、Masson染色,用修改后的Deleve評分標準進行病理學評分;并用免疫組織化學法和RT-PCR法檢測肝組織的TGF-β1和CTGF表達水平。
　　結(jié)果:
　　1.土三七組、低劑量強的松干預

8、組和高劑量強的松干預組分別有24只、5 R和7只小鼠成模,PBS正常對照組無一成模。
　　2.與土三七組比較,兩組強的松干預組小鼠RBC及PLT計數(shù)稍有增加,WBC計數(shù)減少,ALB下降明顯輕于土三七組,TBIL增高程度亦低于土三七組(P＜0.05),ALT和AST無明顯差異,不同劑量干預組間無明顯差異(P＞0.05);低劑量強的松干預組小鼠肝指數(shù)明顯下降(P＜0.01),但高劑量強的松干預組小鼠肝指數(shù)改變不明顯(P＞0.05)。<

9、br>　　3.根據(jù)修改后的Deleve評分標準,土三七組小鼠多表現(xiàn)為中-重度HSOS,強的松干預組多表現(xiàn)為輕-中度,無重度HSOS發(fā)生,其中以低劑量組平均評分更低(P＞0.05)。
　　4.肝組織TGF-β1和CTGF表達:免疫組化和RT-PCR均顯示兩組強的松干預組與土三七組比較,TGF-β1和CTGF表達明顯減少(P＜0.05),不同劑量干預組間無明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.強的松干預可降低土三

10、七誘導的小鼠HSOS發(fā)生,改善小鼠一般情況和肝功能水平,減輕肝竇內(nèi)皮細胞損害及肝竇纖維化等肝臟病理組織學損傷。
　　2.與高劑量強的松(10mg·kg-1·d-1)比較,低劑量強的松(5mg·kg-1·d-1)干預土三七誘導的HSOS小鼠模型,在改善肝竇纖維化方面并無顯著差異,但就血藥濃度及遠期副作用考慮,5mg·kg-1·d-1可能為更為理想的防治劑量。
　　3.TGF-β1和CTGF的表達水平可反映HSOS的病情程度、病

11、理改變及臨床轉(zhuǎn)歸等情況,對觀察療效、評估預后等有重要意義。
　　第三章強的松對土三七誘導HSOS防治機制的探討
　　目的:研究強的松對炎性因子及致纖因子的表達及調(diào)控機制,從ECM的合成與降解、參與肝竇纖維化形成的細胞因子角度探討強的松作為HSOS治療藥物的可能性及作用途徑和機制,為HSOS的治療提供進一步的理論和實驗依據(jù)。
　　方法:115只清潔級健康雌性昆明小鼠隨機分為四組:PBS正常對照組、土三七組、低劑量強的松干

12、預組(5mg·kg-1·d-1)和高劑量強的松干預組(10mg·kg-1·d-1)分別灌胃30天后處死小鼠。應用RT-PCR法檢測肝組織中MMP-1、TIMP-1、MCP-1、TNF-α、IL-1β和NF-κBp65mRNA的表達,western blot法檢測TNF-α、TGF-β1和CTGF蛋白的表達。
　　結(jié)果:
　　1.RT-PCR結(jié)果:土三七組小鼠肝組織中MMP-1、TIMP-1、MCP-1、TNF-α、IL-1β

13、、NF-κBp65 mRNA的表達較。PBS正常對照組顯著增高(P＜0.01),強的松干預后肝組織中NF-κBp65、TNF-α、IL-1β、MCP-1 mRNA的表達較模型組下降(P＜0.05)。與PBS正常對照組比較,土三七組MMP-1/TIMP-1顯著減小(P＜0.01),強的松干預后MMP-1/TIMP-1較土三七組明顯上升(P＜0.05)。不同劑量干預組間無明顯差異(P＞0.05)。
　　2.Westem blot結(jié)果:

14、土三七組小鼠肝組織中TNF-α、TGF-β1和CTGF蛋白的表達較PBS正常對照組顯著增高(P＜0.01),強的松干預后肝組織中TNF-α、TGF-β1和CTGF蛋白的表達較模型組下降(P＜0.05),且不同劑量干預組間無明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:強的松在土三七誘導HSOS模型過程中,可能通過下調(diào)核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的表達,調(diào)控趨化蛋白MCP-1和炎癥因子TNF-α和IL-1β,進而減少HSC的活化,抑制TGF-β1、