熊去氧膽酸在土三七誘導(dǎo)的小鼠肝竇阻塞綜合征中的防治作用及機(jī)制探討.pdf

1、第一章，土三七誘導(dǎo)小鼠肝竇阻塞綜合征模型的建立及評價(jià)
　　目的:
　　分別用土三七、云南三七、野百合堿(MCT)、環(huán)磷酰胺(CTX)、四種藥物誘導(dǎo)小鼠HSOS模型，并用磷酸鹽緩沖液(PBS)作為對照組。對各模型組進(jìn)行比較，以尋求高成功率且穩(wěn)定的造模方法，為進(jìn)一步探討HSOS發(fā)病機(jī)制提供模型基礎(chǔ)。
　　方法:
　　135只小鼠隨機(jī)分為五組:土三七組、云南三七組、野百合堿組、環(huán)磷酰胺組、和PBS對照組。分別予以野百合

2、堿灌胃7天，土三七、云南三七、環(huán)磷酰胺或PBS灌胃30天后處死小鼠。檢測血清中血常規(guī)及肝功能指標(biāo)，留取肝組織行HE染色、Masson染色，用修改后的Deleve評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理學(xué)評分。
　　結(jié)果:
　　1.土三七組、野百合堿組和環(huán)磷酰胺組分別有24只、23只和5只小鼠成模，PBS對照組和云南三七組小鼠無一成模。
　　2.與PBS對照組比較，土三七組及野百合堿組小鼠WBC計(jì)數(shù)較正常組升高，RBC、PLT較正常組明顯降低(

3、P＜0.05);環(huán)磷酰胺組小鼠WBC、RBC及PLT計(jì)數(shù)均較正常組有所下降(P＜0.05);各成模小鼠肝重/體重、ALT、AST、TBIL、DBIL均明顯升高，ALB明顯降低(P＜0.05)。
　　3.根據(jù)修改后的Deleve評分標(biāo)準(zhǔn)，土三七組及環(huán)磷酰胺組成模小鼠多表現(xiàn)為中、重度HSOS，而野百合堿成模小鼠多表現(xiàn)為輕、中度HSOS。
　　結(jié)論:
　　土三七、野百合堿及環(huán)磷酰胺均能誘導(dǎo)小鼠HSOS模型云南三七未能誘導(dǎo)出H

4、SOS模型。土三七誘導(dǎo)的小鼠HSOS模型成模率達(dá)80％，且多為慢性模型，是進(jìn)一步研究HSOS發(fā)病機(jī)制及防治措施的更為理想的模型。
　　第二章，熊去氧膽酸對土三七誘導(dǎo)的小鼠肝竇阻塞綜合征防治作用的觀察
　　目的:
　　探討不同劑量熊去氧膽酸對土三七誘導(dǎo)的小鼠HSOS的預(yù)防性治療作用。
　　方法:
　　115只小鼠隨機(jī)分為PBS對照組、土三七組、低劑量熊去氧膽酸干預(yù)組（15mg/kg/d）和高劑量熊去氧膽酸干預(yù)

5、組（30mg/kg/d），灌胃30天后處死小鼠。留取血清及肝組織。測肝重/體重;檢測血清ALT、AST、TBIL、DBIL、ALB水平;對肝組織進(jìn)行HE染色和Masson染色，用修改后的Deleve評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理學(xué)評分;并用免疫組織化學(xué)法檢測肝組織纖溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.土三七組、低劑量熊去氧膽酸干預(yù)組和高劑量熊去氧膽酸干預(yù)組各有24只、7只、4只小鼠發(fā)生HSOS。與土三七

6、組比較，各干預(yù)組小鼠肝重/體重，血清ALT、AST、TBIL、DBIL有所下降，ALB有所升高，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，以高劑量干預(yù)組改善更為明顯。
　　2.各組小鼠肝臟病理評分結(jié)果:根據(jù)修改后的Deleve評分標(biāo)準(zhǔn)，土三七組小鼠多表現(xiàn)為中、重度HSOS;低劑量熊去氧膽酸干預(yù)組多表現(xiàn)為輕中度HSOS，僅1只為重度;高劑量熊去氧膽酸干預(yù)組4只成模小鼠均表現(xiàn)為輕中度HSOS。
　　3.肝組織PAI-1免疫組化結(jié)果:土

7、三七組小鼠肝組織中PAI-1表達(dá)水平較正常對照組明顯增高。與土三七組比較，各干預(yù)組PAI-1表達(dá)水平均明顯降低(P＜0.05)，以高劑量干預(yù)組下降更為明顯，兩干預(yù)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.熊去氧膽酸對土三七誘導(dǎo)的小鼠HSOS有一定的防治作用，能減輕小鼠的臨床癥狀、改善其肝功能，減輕病理損害程度。高劑量熊去氧膽酸組的防治效果較低劑量組更為明顯。
　　2.各組小鼠肝組織中PAI-1表達(dá)水平

8、與肝臟的病變輕重相關(guān)，提示PAI-1可作為HSOS病情嚴(yán)重程度和療效的監(jiān)測指標(biāo)。
　　第三章，熊去氧膽酸對土三七誘導(dǎo)的小鼠肝竇阻塞綜合征防治機(jī)制的探討
　　目的:
　　通過檢測和比較熊去氧膽酸干預(yù)對土三七誘導(dǎo)的HSOS小鼠肝組織Nrf2/ARE通路的影響，探討熊去氧膽酸保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　方法:
　　115只小鼠隨機(jī)分為PBS對照組、土三七組、低劑量熊去氧膽酸干預(yù)組(15mg/kg/d)和高劑量熊去氧

9、膽酸干預(yù)組(30mg/kg/d)，灌胃30天后處死所有小鼠。檢測各組小鼠肝組織8-OHGD、MDA、GSH、SOD水平，應(yīng)用RT-PCR法檢測各組肝組織Nrf2、SOD、γ-GCS mRNA水平;免疫蛋白印跡雜交法(Western blot)檢測肝臟組織γ-GCS及胞漿、胞核Nrf2蛋白表達(dá)水平，并比較各組Nrf2的DNA結(jié)合活性。
　　結(jié)果:
　　1.與PBS對照組比較，三個(gè)藥物干預(yù)組8-OHGD、MDA水平顯著增高(P＜

10、0.01)，GSH、SOD水平顯著降低（P＜0.01或P＜0.05）;兩個(gè)熊去氧膽酸干預(yù)組8-OHGD、MDA水平明顯低于土三七組(P＜0.01或P＜0.05)，GSH、SOD水平則明顯高于土三七組（P＜0.01或P＜0.05）
　　2.與PBS對照組比較，三個(gè)藥物干預(yù)組SOD、γ-GCS mRNA水平均明顯增高(P＜0.01)，Nrf2 mRNA水平各組間無明顯差異;兩個(gè)UDCA干預(yù)組SOD、γ-GCS mRNA水平均高于土三七

11、組(P＜0.01或P＜0.05)，低劑量UDCA干預(yù)組與高劑量UDCA干預(yù)組組間比較無明顯差異。
　　3.與PBS對照組比較，三個(gè)藥物干預(yù)組胞漿γ-GCS、Nrf2蛋白水平均明顯增高(P＜0.01)，兩個(gè)UDCA干預(yù)組γ-GCS蛋白水平高于土三七組(P＜0.01或P＜0.05)，而Nrf2蛋白水平則低于土三七組;在胞核內(nèi)，三個(gè)藥物干預(yù)組Nrf2蛋白水平均高于對照組，兩個(gè)UDCA干預(yù)組胞核內(nèi)Nrf2蛋白均高于土三七組，兩個(gè)UDCA干

12、預(yù)組胞漿、胞核內(nèi)Nrf2蛋白水平組間比較均無明顯差異;
　　4.與PBS對照組比較，三個(gè)藥物干預(yù)組Nrf2的DNA結(jié)合活性均明顯增高(P＜0.01)，兩個(gè)UDCA干預(yù)則高于土三七組(P＜0.01或P＜0.05)，高劑量UDCA干預(yù)組高于低劑量組。
　　結(jié)論:
　　1.熊去氧膽酸干預(yù)可降低土三七誘導(dǎo)的HSOS小鼠肝臟氧化應(yīng)激損傷，增加肝臟內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)GSH和SOD水平;
　　2.熊去氧膽酸可能通過促進(jìn)Nrf2的