抗氧化劑對(duì)鈾礦塵致人巨噬細(xì)胞功能損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的
　　探究鈾礦塵對(duì)人巨噬細(xì)胞功能影響的研究以及四種抗氧化劑(NAC、SOD、CAT、甘露醇)對(duì)鈾礦塵介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞損傷保護(hù)作用，為降低鈾礦塵致肺損傷尋找防護(hù)劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法
　　將實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組(0μg/cm2)和實(shí)驗(yàn)組(25、50、100、200和400μg/cm2)，通過MTT法檢測(cè)鈾礦塵對(duì)人巨噬細(xì)胞(THP-1)存活率影響的時(shí)效關(guān)系；采用Annexin-V FITC/PI雙染法以及Hoechst33

2、258熒光標(biāo)記法來分析鈾礦塵對(duì)人巨噬細(xì)胞凋亡率和凋亡形態(tài)學(xué)的影響；經(jīng)2,7-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)染色后，采用熒光顯微鏡及化學(xué)/熒光發(fā)光儀檢測(cè)鈾礦塵對(duì)人巨噬細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平的變化情況；分別用熒光染料JC-10、FLUO-8AM、CMFDA染色后，化學(xué)/熒光發(fā)光儀檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞線粒體膜電位、細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子(Ca2+)及胞內(nèi)谷胱甘肽(GSH)水平的變化情況；FITC標(biāo)記的大腸桿菌與不同濃度鈾礦塵處理12 h

3、后的THP-1巨噬細(xì)胞共同孵育2 h，化學(xué)/熒光發(fā)光儀檢測(cè)其熒光強(qiáng)度，分析鈾礦塵對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響；液體懸浮芯片系統(tǒng)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞因子(IL-1β、GM-CSF、TNF-α、IL-8等)時(shí)效關(guān)系的變化特征。
　　抗氧化劑(NAC、SOD、CAT、甘露醇)孵育 THP-1巨噬細(xì)胞后，檢測(cè)鈾礦塵致巨噬細(xì)胞損傷后細(xì)胞凋亡、凋亡相關(guān)指標(biāo)、吞噬功能以及細(xì)胞因子的變化情況，比較研究四種抗氧化劑對(duì)鈾礦塵致人巨噬細(xì)胞功能損傷的保

4、護(hù)作用。
　　結(jié)果
　　鈾礦塵染毒人巨噬細(xì)胞后，細(xì)胞存活率呈暴露時(shí)間和劑量依賴性下降。胞內(nèi)ROS的變化水平和細(xì)胞凋亡率與染毒劑量呈正相關(guān)，上升的ROS水平加快GSH耗竭。同時(shí)伴隨線粒體跨膜電位的下降與胞內(nèi)Ca2+水平上升。細(xì)胞的吞噬功能隨著鈾礦塵濃度的升高而逐漸被抑制，低劑量鈾礦塵處理時(shí) IL-1β、GM-CSF、TNF-α和IL-8等細(xì)胞因子的表達(dá)量呈逐漸增加狀態(tài)，加快了炎癥反應(yīng)。
　　四種抗氧化劑(SOD、CAT、

5、甘露醇、NAC)孵育 THP-1巨噬細(xì)胞后，存活率較處理前明顯上升，凋亡率也呈下降趨勢(shì)，氧化損傷指標(biāo)影響的(ROS和GSH變化水平)也呈對(duì)應(yīng)變化趨勢(shì)。其中，NAC和甘露醇組作用效果最為明顯。NAC孵育后較孵育前能明顯抑制巨噬細(xì)胞吞噬功能的降低，IL-1β、GM-CSF、TNF-α、IL-8等細(xì)胞因子的上升幅度較孵育前也明顯降低。胞內(nèi)活性氧自由基(H2O2、O2-·、·OH等)的產(chǎn)生與鈾礦塵致人巨噬功能損傷呈正相關(guān)，·OH可能是細(xì)胞損傷過

6、程中最主要的活性氧自由基，其具體作用機(jī)制需要進(jìn)一步研究。
　　結(jié)論
　　1．鈾礦塵能誘導(dǎo) THP-1巨噬細(xì)胞凋亡，降低細(xì)胞存活率，早期鈾礦塵致細(xì)胞損傷是以凋亡為主的毒性影響。
　　2．鈾礦塵可以抑制THP-1巨噬細(xì)胞的吞噬功能，可使胞內(nèi)ROS水平上升以及GSH相對(duì)水平含量降低。鈾礦塵致巨噬細(xì)胞功能損傷過程中，能引起TNF-α、IL-8、TGF-β等細(xì)胞因子含量的升高。
　　3．NAC、CAT、SOD、甘露醇四種抗