小鼠Fcα-μR組織學(xué)定位初步研究.pdf

1、Fcα/μR是一種近年發(fā)現(xiàn)的能夠與IgA、IgM結(jié)合的Fc受體，基因表達(dá)譜廣泛，在小鼠多種臟器組織中均檢測(cè)到其mRNA的表達(dá)。小鼠Fcα/μR(mFcα/μR)可以介導(dǎo)B細(xì)胞對(duì)免疫復(fù)合物的內(nèi)吞，但是有關(guān)Fcα/μR生物學(xué)功能的更多研究尚在進(jìn)行中。pIgR也是一種IgA、IgM受體，擔(dān)負(fù)著將pIgA轉(zhuǎn)運(yùn)至粘膜細(xì)胞表面的重要使命，是機(jī)體粘膜免疫的重要分子。由于Fcα/μR與pIgR在染色體的基因定位相鄰，且二者序列蛋白序列同源性較高，加之在

2、與IgA、IgM結(jié)合功能方面具有相似性，因此，本論文將mFcα/μR與mpIgR進(jìn)行了對(duì)比分析，以期為mFcα/μR的功能研究提供更有力的證據(jù)。 首先，本論文的研究從抗體的制備著手。通過(guò)原核表達(dá)的方法得到了mFcα/μR及mpIgR重要結(jié)構(gòu)域蛋白，并以純化過(guò)的表達(dá)蛋白為抗原免疫大鼠，制備了大鼠抗mFcα/μR及mpIgR單克隆、多克隆抗體。經(jīng)過(guò)ELISA、Western blot、FACS及細(xì)胞免疫化學(xué)等方法的多次鑒定，挑選出了

3、可以特異識(shí)別mFcα/μR及mpIgR的單克隆抗體，確定了多克隆抗體的抗原識(shí)別特異性。 為了探討mFcα/μR的組織定位，本研究通過(guò)使用RT-PCR及免疫組織化學(xué)的方法對(duì)mFcα/μR及mpIgR的基因及蛋白水平的表達(dá)譜進(jìn)行了檢測(cè)和對(duì)比分析。實(shí)驗(yàn)證明，mFcα/μR比mpIgR的基因表達(dá)略廣，在正常小鼠肝、心、脾、肺、腎、小腸、大腸、胸腺、睪丸、子宮及卵巢均有mRNA表達(dá)。但是在蛋白水平，通過(guò)使用不同的切片方法及嘗試多種抗原修復(fù)

4、條件對(duì)正常小鼠、DSS誘導(dǎo)腸炎模型小鼠及BSA免疫小鼠進(jìn)行組織切片的免疫組織化學(xué)染色后，均未檢測(cè)到mFcα/μR的表達(dá)。而同時(shí)對(duì)mpIgR的檢測(cè)結(jié)果則基本與文獻(xiàn)報(bào)道相符。 綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，推測(cè)mFcα/μR可能與mpIgR發(fā)揮相似的作用，在二者同時(shí)存在時(shí)，mpIgR發(fā)揮主要作用，而mFcα/μR則保持較低的維持量表達(dá)。這種較低的表達(dá)水平可以在基因水平檢測(cè)到，卻可能已經(jīng)超出免疫組織化學(xué)的檢驗(yàn)靈敏度、從而無(wú)法在蛋白水平被檢測(cè)到。當(dāng)

5、mpIgR功能缺陷(如mpIgR基因敲除)或mpIgR發(fā)揮功能障礙(如J鏈基因敲除)時(shí)，mFcα/μR可能會(huì)表達(dá)增強(qiáng)，從而代替mpIgR發(fā)揮轉(zhuǎn)運(yùn)IgA、IgM的功能。為了證明上述假設(shè)，還需開(kāi)展大量的實(shí)驗(yàn)研究工作。 此外，還對(duì)大鼠Fcα/μR(rFcα/μR)的基因及蛋白表達(dá)情況進(jìn)行了初步探討。RT-PCR結(jié)果表明，rFcα/μR的基因表達(dá)譜與mFcα/μR相似，比rCD89及rpIgR表達(dá)略廣，在正常大鼠肝、心、脾、肺、腎、小腸