實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力免疫耐受機(jī)制異常的研究.pdf

1、本文主要從以下四個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　第一部分 實(shí)驗(yàn)性重癥肌無(wú)力小鼠模型的研究
　　目的：采用純化乙酰膽堿受體(acetylcholine receptors,AChR)免疫小鼠以建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)動(dòng)物模型。
　　方法:用親和層析法從電鰩電器官中提取和純化AChR,并用其免疫C57BL/6小鼠,觀察接種動(dòng)物的臨床

2、癥狀,重復(fù)神經(jīng)電刺激、血清乙酰膽堿受體抗體(AChRab)水平以及電鏡下神經(jīng)肌肉接頭的情況。根據(jù)臨床癥狀及重復(fù)電刺激試驗(yàn)結(jié)果將造模小鼠分為成模組及未成模組,并與弗氏佐劑對(duì)照組及正常對(duì)照組比較。
　　結(jié)果:與未成模組、弗氏佐劑對(duì)照組及正常對(duì)照組相比,成模組小鼠表現(xiàn)出肌力減弱的癥狀,重復(fù)神經(jīng)電刺激(repetitive nerve stimulation,RNS)復(fù)合動(dòng)作電位波幅幅度顯著下降,發(fā)病小鼠血清抗體水平明顯升高(P<0.01

3、),電鏡證實(shí)神經(jīng)肌接頭處突觸后膜變平、皺褶減少。造模成功率為55％。
　　結(jié)論:用電鰩電器官提純乙酰膽堿受體(TAChR)作為免疫原,能成功誘導(dǎo)產(chǎn)生EAMG小鼠模型。
　　第二部分 EAMG模型小鼠免疫功能狀態(tài)的改變
　　目的:探討EAMG模型小鼠免疫應(yīng)答特點(diǎn)。
　　方法:根據(jù)臨床癥狀及重復(fù)電刺激試驗(yàn)結(jié)果將造模小鼠分為成模組及未成模組,檢測(cè)其免疫功能狀態(tài)的改變,包括血清中AchRab的水平,脾臟CD4+T細(xì)胞數(shù)量

4、,用淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)檢測(cè)脾細(xì)胞經(jīng)刀豆蛋白A(ConA)活化的非特異增殖能力,檢測(cè)脾臟T細(xì)胞細(xì)胞因子白細(xì)胞介素4(IL-4),干擾素γ(IFN-γ)分泌水平。并與弗氏佐劑(CFA)對(duì)照組及正常對(duì)照組進(jìn)行比較。
　　結(jié)果:與未成模組、弗氏佐劑對(duì)照組及正常對(duì)照組相比,成模組小鼠自身抗體AchRab顯著增高,脾臟CD4+T細(xì)胞數(shù)升高;外周脾細(xì)胞對(duì)ConA刺激的非特異性增殖能力顯著升高;脾臟T細(xì)胞細(xì)胞因子IL-4,IFN-γ顯著升高,均為P

5、<0.01,IFN-γ升高的程度高于IL-4(P<0.01)。
　　結(jié)論:EAMG發(fā)生是一個(gè)自身免疫應(yīng)答參與的過(guò)程,體液免疫、細(xì)胞免疫應(yīng)答參與了實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力的發(fā)生。
　　第三部分 EAMG模型小鼠外周免疫耐受異常的研究
　　目的:探討EAMG模型小鼠外周免疫耐受機(jī)制異常在疾病發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　方法:檢測(cè)成模組小鼠CD4+脾細(xì)胞中CD4+CD25+T細(xì)胞(Treg)水平,脾細(xì)胞Foxp3 mR

6、NA的表達(dá)情況,并與未成模組、弗氏佐劑組及正常對(duì)照組進(jìn)行比較。
　　結(jié)果:與未成模組、弗氏佐劑對(duì)照組及正常對(duì)照組相比,成模組小鼠CD4+脾細(xì)胞內(nèi)Treg的水平明顯下降(P<0.01),脾細(xì)胞Foxp3 mRNA的表達(dá)降低(P<0.01)。
　　結(jié)論:EAMG小鼠模型存在外周耐受缺陷,FoxP3基因通過(guò)影響Treg的數(shù)量和功能在EAMG的發(fā)病中起了作用。
　　第四部分 EAMG模型小鼠中樞免疫耐受異常的研究
　　目

7、的:探討EAMG模型鼠中樞免疫耐受機(jī)制異常在疾病發(fā)生、發(fā)展中的作用
　　方法:檢測(cè)成模組小鼠胸腺內(nèi)Treg水平,胸腺細(xì)胞增殖能力,胸腺細(xì)胞因子分泌水平,胸腺內(nèi)乙酰膽堿受體α1亞基基因表達(dá)水平,胸腺內(nèi)AIRE的基因表達(dá)水平,并與未成模組、弗氏佐劑對(duì)照組及正常對(duì)照組進(jìn)行比較。
　　結(jié)果:與未成模組、弗氏佐劑對(duì)照組及正常對(duì)照組相比,成模組小鼠胸腺內(nèi)CD4+T細(xì)胞水平不變(P>0.05),而胸腺內(nèi)Treg相對(duì)于CD4+細(xì)胞水平卻明顯