IL-17和CXCL-13在大鼠實驗性自身免疫性重癥肌無力及人胸腺瘤合并重癥肌無力中的作用.pdf

1、背景及目的:
　　重癥肌無力(myasthenia gravis，MG)是由抗乙酰肌堿受體抗體(acetylcholinereceptor antibody，AChR-Ab)介導(dǎo)，針對神經(jīng)肌肉接頭(neuromuscularj unction，NMJ)突觸后膜上乙酰膽堿受體(acetylcholine receptor，AChR)進行性破壞的一種自身免疫性疾病。目前MG尚無特異性治療方法，因此迫切需要明確MG的發(fā)病機制。實驗性自身

2、免疫性重癥肌無力（experimental autoimmune myasthenia gravis，EAMG）是MG的一種可靠動物模型，兩者在臨床表現(xiàn)、電生理學(xué)及免疫學(xué)上都具有很大的相似性。EAMG多以電鰻器官AChR為免疫抗原，但其在國內(nèi)很難獲得，故需要一種簡單易行成功率高的建立重癥肌無力模型的方法。
　　研究表明Th17在MG/EAMG的發(fā)病機制中具有十分重要的作用，在EAMG發(fā)病機制中Th17輔助B細胞產(chǎn)生自身抗體不依賴于

3、Th1。CXCL13是一種在免疫反應(yīng)中其重要作用的趨化細胞因子，在B淋巴細胞尋靶和遷移到淋巴組織中T和B細胞區(qū)起重要作用。最近報道體外人Th17克隆表達CXCL13，而Th1和Th2不表達。那么在大鼠EAMG中IL-17與CXCL13表達水平的關(guān)系需進一步證實。
　　10％～20％的MG患者合并有胸腺瘤，33％-75％的胸腺瘤患者同時合并有重癥肌無力。行胸腺切除術(shù)后重癥肌無力的臨床癥狀減輕以及痊愈的患者占70％。因此我們認為胸腺瘤

4、和重癥肌無力的發(fā)生有著密切的關(guān)系。但胸腺瘤合并MG的機制目前還不是很清楚，探討IL-17和CXCL-13及CD4+T在人胸腺瘤合并MG發(fā)病機制中的作用非常重要。
　　本研究以大鼠EAMG和27例胸腺瘤患者為研究對象，探討結(jié)核桿菌H37RA劑量與EAMG發(fā)病相關(guān)性，IL-17和CXCL13在EAMG和胸腺瘤合并MG中的表達及相關(guān)性，旨在探討建立高成功率EAMG的方法，揭示IL-17和CXCL13在MG發(fā)病機制中的作用，為臨床治療提供

5、新靶點。
　　方法:
　　1.H37Ra在實驗性自身免疫性重癥肌無力模型中的作用:用大鼠AChRα亞單位97-116肽段(DGDFAIVKFTKVLLDYTGHI)、完全弗氏佐劑并輔以結(jié)核桿菌H37RA作抗原建立Lewis大鼠EAMG動物模型。通過對大鼠EAMG的臨床評分觀察來發(fā)現(xiàn)結(jié)核菌素在模型建立中的作用。
　　2.IL-17和CXCL-13在EAMG發(fā)病機制中的作用:在用肽段免疫建立大鼠EAMG同時給予外源性IL-

6、17， ELISA法檢測大鼠脾、淋巴結(jié)上清液和血清CXCL13水平，大鼠血清IgG1，IgG2a，IgG2b抗體水平，與PBS對照組比較。
　　3.IL-17和CXCL-13在胸腺瘤合并MG中的作用:回顧分析患者的相關(guān)臨床資料，并對胸腺瘤組織蠟塊進行IL-17、CXCL-13和CD4+免疫組化研究，然后將結(jié)果與相關(guān)臨床資料進行比較，探討IL-17和CXCL-13在胸腺瘤合并重癥肌無力中的作用。
　　4.統(tǒng)計學(xué)分析:采用SPS

7、S17.0統(tǒng)計軟件分析，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有顯著性意義。
　　結(jié)果:
　　1.用大鼠AChR-α亞單位97-116肽段免疫Lewis大鼠后，出現(xiàn)兩個發(fā)病時相，分別開始于免疫后第7天、第35天左右，并分別于第15天和第40天左右達到發(fā)病高峰。增加H37Ra的劑量，大鼠EAMG發(fā)病率高達75％，且其癥狀明顯加重。
　　2.EAMG大鼠脾、淋巴結(jié)細胞上清液和血清中的CXCL13水平均高于空白對照組。給予

8、外源性IL-17的實驗組大鼠血清AChR特異性抗體Ig2b明顯高于給予PBS注射的對照組，脾、淋巴結(jié)細胞上清液和血清中的CXCL13水平均高于給予PBS注射的對照組。
　　3.B1、B2和B3型為主的胸腺瘤合并MG的可能性較大分別為50％、60％和66.7％，而C型同時合并MG的可能性非常小，而良性的胸腺瘤并發(fā)重癥肌無力的概率越大，且主要為Ⅱ型，淋巴細胞型胸腺瘤易伴發(fā)重癥肌無力。胸腺瘤合并MG的胸腺瘤組織高表達細胞因子IL-17和