癱痿膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力小鼠血清IL-4及TGF-β1的影響.pdf

1、目的　建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力(expermental autoimmune myasthenia　gravis,EAMG)小鼠模型，通過(guò)觀察癱痿膠囊對(duì)EAMG小鼠的臨床癥狀、血清乙酰膽堿受體抗體(acetylcholine receptor antibody，AChR-Ab)、白細(xì)胞間介素4(interleukin-4,IL-4)、轉(zhuǎn)移趨化生長(zhǎng)因子β1(transgrowth factor-β1,TGF-β1)的影響，探討其作用

2、機(jī)制。 方法　健康雌性C57BL/6小鼠90只，隨機(jī)分為正常組(10只)、完全福氏佐劑(complete freunds　adjuvant，CFA)組(10只)、EAMG組(70只)。EAMG組造模方法：每只小鼠于背部、尾基部、足墊部皮下多點(diǎn)注射含．AChR α <,1> 129-145肽段15μg的抗原乳劑20μL，初次免疫后第3周再次注射上述抗原乳劑。CFA組同期同部位只皮下注射CFA20μL，正常組不做皮下注射。記錄小鼠的

3、體重變化，參考Lennon的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)臨床癥狀等級(jí)，低頻重復(fù)神經(jīng)刺激(repetitive nerve　stimulation，RNS)檢測(cè)坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位衰減率，酶聯(lián)免疫法檢測(cè)AChR-Ab，綜合臨床癥狀、血清AChR-Ab水平、體重、RNS衰減率等結(jié)果判斷動(dòng)物模型是否成功。然后將成功的EAMG小鼠隨機(jī)分為5組：癱痿膠囊高劑量組(5.6g／kg·d)、中劑量組(2.8g／kg·d)、低劑量組(1.4g／kg·d)、醋酸潑尼松組(10

4、mg／kg·d)及模型空白組(不予灌藥)，共治療4周。記錄各組小鼠的體重變化及臨床癥狀等級(jí)評(píng)分，酶聯(lián)免疫法檢測(cè)AChR-Ab、IL-4、TGF-β1。 結(jié)果造模70只小鼠中成功的EAMG小鼠有41只。EAMGG小鼠體重增加減緩，出現(xiàn)較明顯的肌無(wú)力癥狀，臨床癥狀評(píng)分為(2．06±0．32)，與正常組、佐劑組有顯著性差異(P<0．01)；血清AChR-Ab水平(1．91±0．56)顯著高于正常組(0．59±0．04)及佐劑組(0．6

5、5±0．04)；RNS檢查衰減率(27．31±4．28)也與正常(-2．57±0．94)、佐劑組(-3．09±0．86)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。治療4周后，與模型空白組小鼠比較，不同劑量的癱痿膠囊及一定劑量的醋酸潑尼松治療組小鼠臨床癥狀評(píng)分減少，血清AChR-Ab水平降低，體重增加幅度增多，血清TGF-βl水平升高，IL-4的水平降低，以癱痿膠囊高中劑量組及強(qiáng)的松組小鼠作用程度明顯。癱痿膠囊高中劑量組和強(qiáng)的松組的比較未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

6、結(jié)論 1．本實(shí)驗(yàn)用AChR-a<,1>亞單位129-145多肽免疫C57BL／6小鼠，誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)小鼠與人類(lèi)MG在臨床癥狀、AChR-Ab及RNS等方面的改變相似，初步判斷EAMG模型成功建立，為研究MG發(fā)病機(jī)制及癱痿膠囊藥效學(xué)提供了條件。 2．癱痿膠囊治療EAMG有效。分析其機(jī)制可能是：通過(guò)升高外周血TGF-β 1的水平、降低過(guò)高的IL-4，調(diào)節(jié)異常的AChR特異性免疫應(yīng)答，抑制AChR-Ab的產(chǎn)生，從而達(dá)到改善臨床癥