糖尿病大鼠心肌膽固醇轉(zhuǎn)出相關(guān)基因mRNA表達(dá)變化的研究.pdf

1、糖尿病是嚴(yán)重的糖脂代謝紊亂性疾病。脂代謝紊亂是糖尿病并發(fā)癥的重要原因。過氧化酶體增殖物活化受體α(PPARα)在心肌中表達(dá)豐富，是調(diào)節(jié)脂肪酸分解代謝的重要的核轉(zhuǎn)錄因子。糖尿病時由于胰島素缺乏和(或)胰島素抵抗，機(jī)體脂肪動員增加。由于脂肪酸的增加，使心肌細(xì)胞PPARα慢性激活，PPARα所調(diào)控的脂肪酸攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)及氧化的基因表達(dá)增加，致使糖尿病心肌細(xì)胞幾乎全部通過脂肪酸β-氧化提供能量。但是隨著糖尿病病程的發(fā)展，糖尿病心肌細(xì)胞的脂肪酸的攝取

2、速度超過了氧化速度，導(dǎo)致脂肪酸在心肌的沉積。目前認(rèn)為，這是糖尿病心肌病發(fā)病的分子機(jī)理之一。 目的： 1、觀察糖尿病大鼠心肌PPARα活性及表達(dá)改變的同時，觀察LXRα及其下游基因ABCA1的表達(dá)以及膽固醇水平的變化。 2、給予大鼠菲諾貝特類藥，觀察糖尿病大鼠心肌PPARα激活或表達(dá)的情況，以及上述膽固醇代謝相關(guān)基因的表達(dá)情況。從膽固醇代謝的角度探討糖尿病心肌脂代謝紊亂的分子機(jī)理。 方法： 1．糖尿

3、病大鼠模型制備。禁食 12h 后，糖尿病各組大鼠一次性腹腔注射 2％ STZ65mg/kg，注射后72h，尾靜脈采血測定禁食6h后的空腹血糖，血糖濃度大于16.7mmol/L的大鼠確定為糖尿病大鼠。正常各組大鼠腹腔注射等量檸檬酸鈉緩沖液。 2．動物分組及取材。將10周齡成年雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分為6組。①對照組(CON組)：②糖尿病6周組(6DM組/CON2組)：糖尿病模型成功后6周處死；③糖尿病12周組(12DM組)：

4、糖尿病模型成功后12周處死；④糖尿病17周組(17DM組)：糖尿病模型成功后17周處死。⑤糖尿病6周給藥組(DM+F組)：糖尿病模型成功4周后用菲諾貝特灌胃(100 mg/kg/day) 2周至第6周處死；⑥對照給藥組(CON+F組)：與⑤同時處死，處死前連續(xù)用菲諾貝特灌胃(100 mg/kg/day) 2周；大鼠禁食一夜后處死，頸動脈采血，血清用于血清葡萄糖測定。心臟用于RNA及心肌總脂提取。 3．心肌總脂提?。簠⒄瘴墨I(xiàn)提取

5、心肌總脂，用于膽固醇測定。 4．心肌膽固醇及血清葡萄糖測定用全自動生化分析儀，酶法測定。 5．心肌總RNA的提取，鑒定及定量。用Trizol法提取總RNA，電泳鑒定，根據(jù)OD<,260>定量總RNA濃度。 6．mRNA的定量用GAPDH作為內(nèi)參照，利用RT-PCR法測定心肌PPARα-mRNA，ACO-mRNA，LXRα-mRNA，ABCA1-mRNA的相對表達(dá)量。 結(jié)論： 1．雖然在糖尿病發(fā)展至