大腸癌分化差異表達基因MAGEA3與分化差異表達CRC-EST1的初步研究.pdf

1、大腸癌(colorectalcancer，CRC)是嚴重威脅人類健康的主要腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。隨著分子生物學研究的不斷深入，腫瘤確認為一種基因病，癌基因的激活與抑癌基因的失活是其發(fā)生發(fā)展的內(nèi)在本質(zhì)。隨著后基因組時代的到來，國內(nèi)外應用具有高度并行性、高通量、微型化和自動化特色的基因芯片技術(shù)對大腸癌基因表達譜進行了較多研究，使大腸癌相關(guān)基因數(shù)據(jù)庫不斷豐富。然而，這些研究僅限于基因表達譜數(shù)據(jù)的初步挖掘，對篩得的大腸癌相關(guān)基因尚缺

2、乏后續(xù)的研究報道，未形成系統(tǒng)性研究。 本課題是許紅民等“不同分化程度大腸癌的基因表達譜分析”課題的延伸。許紅民等首次應用美國Affymetrix公司制備的HG-U133原位合成寡核苷酸芯片(含迄今所知的人類全基因共計32264個，包括19308個已知的人類基因和12956個EST簇)技術(shù)，以相應正常大腸粘膜組織為對照，對不同分化程度大腸癌組織進行基因水平系列研究，篩查得到一系列大腸癌分化差異表達基因及ESTs。其中，MAGEA3

3、為最重要的大腸癌分化差異表達基因；Affymetrix芯片編號為233399xat、RepresentativePublicID為AU145662的EST(本論文暫命名為CRC-EST1)為較重要的大腸癌分化差異表達ESTs之一。 本研究采用的主要實驗方法和步驟： 1.應用免疫組織化學染色技術(shù)，觀察MAGEA3在大腸癌組織中的表達； 2.結(jié)合臨床病理資料，探討MAGEA3表達的臨床意義； 3.應用RT-P

4、CR技術(shù)，考察CRC-EST1在大腸癌組織和相應正常大腸粘膜、肺組織及子宮內(nèi)膜中的表達； 4.應用RACE技術(shù)，釣取該EST的3’端。 本課題的研究結(jié)果如下： 1.免疫組化染色顯示，101例大腸癌標本中，MAGEA3陽性率為31.7％；比較MAGEA3蛋白在大腸癌高、中、低不同分化組的表達，發(fā)現(xiàn)MAGEA3蛋白在大腸癌組織中的表達與分化程度有關(guān)，低分化組表達陽性率及陽性強度均高于其它兩組(p＜0.05)，此結(jié)果與

5、芯片結(jié)果基本一致。 2.臨床病理資料分析提示，MAGEA3的表達與大腸癌的Dukes分期、腫瘤大小、發(fā)生部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、患者年齡、性別等無關(guān)；多因素分析證實Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對患者生存期的影響具有預后提示作用，分期越高患者生存時間越短(p＜0.05)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者其生存時間短(p＜0.05)。 3.RT-PCR方法證實，CRC-EST1可在大腸癌組織、正常大腸粘膜、肺組織及子宮內(nèi)膜中表達；應用RACE技術(shù)，成功