RECK基因在大腸癌與大腸腺瘤組織中的表達(dá)差異的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、細(xì)胞外基質(zhì)的降解對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移及血管生成有重要的意義。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)可降解細(xì)胞外基質(zhì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。而MMP抑制劑可以通過(guò)抑制血管的生成影響腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。RECK是一種新的MMP抑制劑，也是新發(fā)現(xiàn)的腫瘤預(yù)測(cè)基因。 RECK具有抑制MMPs相關(guān)酶系的表達(dá)，其通過(guò)抑制MMPs的生物活性阻斷血管的生成，從而抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移，其中MMPs包括降解細(xì)胞外基質(zhì)成分和與血管有關(guān)的MMP-2，MMP-9和M

2、T1-MMP.目前RECK對(duì)于大腸癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌和肺癌的作用影響己廣泛研究。研究發(fā)現(xiàn)，RECK蛋白可以通過(guò)調(diào)控MMP-2，MMP-9等轉(zhuǎn)移相關(guān)酶系的表達(dá)與活性，并與RECK蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，另外RECK也可能調(diào)節(jié)其他細(xì)胞外信號(hào)分子(TGF-β、VEGF)數(shù)量及調(diào)節(jié)血管生成的作用，還有待進(jìn)一步研究。因此，本研究選取大腸癌及大腸腺瘤組織與正常大腸粘膜的組織為研究對(duì)象，從而探討RECK、VEGF的表達(dá)與大腸癌惡性程度的相

3、關(guān)性。 目的：探討大腸癌及大腸腺瘤組織RECK基因表達(dá)差異及對(duì)VEGF表達(dá)的影響。 方法： 1半定量RT-PCR法：采用RT-PCR法在相同條件下擴(kuò)增所取各標(biāo)本中RECKmRNA和內(nèi)對(duì)照β-actin的表達(dá)情況，測(cè)出RECKmRNA的表達(dá)水平(當(dāng)RECKmRNA和β-actin的比值大于0.5時(shí)為高表達(dá)，小于0.5為低表達(dá))。然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 2免疫組織化學(xué)法：采用SP法，按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，用1:50稀

4、釋的小鼠抗人VEGF單克隆抗體分別檢測(cè)各標(biāo)本中VEGF蛋白的表達(dá)情況，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)合臨床病理資料對(duì)其結(jié)果進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：在RT-PCR所檢測(cè)的20例大腸癌病人標(biāo)本中，RECKmRNA在正常大腸黏膜組織和腺癌表達(dá)率分別為85％(17/20)和40％(8/20)，RECK基因在大腸癌組織中的表達(dá)明顯低于正常組織。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，RECKmRNA在正常大腸黏膜和腺癌之間的表達(dá)情況有明顯差異(P<0.05)；2

5、0例大腸腺瘤病人標(biāo)本中，RECKmRNA在正常大腸黏膜組織和腺瘤表達(dá)率分別為80％(16/20)和45％(9/20)，RECK基因在大腸腺瘤組織中的表達(dá)與正常組織有明顯差異(P<0.05)。在大腸腺癌與腺瘤之間的RECK基因表達(dá)情況經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理也有明顯差異(P<0.05)。 免疫組化結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析可知，大腸癌組織與腺瘤VEGF蛋白的表達(dá)水平無(wú)明顯差異(P>0.05)，但大腸癌組織與腺瘤VEGF蛋白的表達(dá)水平顯著高于正常大腸黏膜(

6、P<0.05)。將大腸癌原發(fā)灶中RECK的表達(dá)情況與臨床病理資料結(jié)合進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)RECK的表達(dá)與患者的性別、年齡、分期及腫瘤的組織分型和分化程度之間無(wú)明顯差異(P>0.05)，但在出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移大腸癌患者的標(biāo)本中RECK的表達(dá)較對(duì)照組明顯降低(P<0.05)。 結(jié)論： 1在大腸癌和大腸腺瘤RECK基因的表達(dá)均低于正常組織，且大腸癌組織的表達(dá)明顯低于大腸腺瘤組織，提示隨著腫瘤惡性程度的增加，RECK基因的表達(dá)亦