APC基因突變的人大腸癌蛋白質(zhì)組差異研究.pdf

1、目的；通過對APC基因突變的人大腸癌組織與APC基因無突變的人大腸癌組織及癌旁正常粘膜組織的雙向凝膠電泳(2-DE)及 MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析，尋找APC陽性患者與APC陰性患者的蛋 白質(zhì)表達(dá)差異點(diǎn)，以及二者與周圍正常粘膜組織的蛋白質(zhì)表達(dá)差異 點(diǎn)，旨在為探索大腸癌的發(fā)生機(jī)制和具體過程提供啟示和有益幫 助。 方法；取散發(fā)性人大腸癌手術(shù)后新鮮標(biāo)本，術(shù)后立即保存，經(jīng) 病理證實(shí)后，利用PCR-SSCP法檢測是否存在A

2、PC基因的突變。將 APC基因突變組、未突變組及正常粘膜3組樣品經(jīng)解凍、均漿、水 化后等電聚膠、平衡、雙向凝膠電泳，采用銀染法染色和透射掃描， 凝膠圖像用PD-quest 7.3軟件分析后選取差異點(diǎn)蛋白，酶解后經(jīng) MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析獲得肽指紋圖，最后在數(shù)據(jù)庫中搜索和蛋 白質(zhì)鑒定。 結(jié)果；經(jīng)PCR-SSCP檢測在31例人大腸癌標(biāo)本中，有14例 (45.2％)癌組織中存在著APC基因MCR區(qū)段的基因突變。在

3、14例 中選取6例高分化腺癌標(biāo)本和另外APC基因無突變組中選取6例高 分化腺癌標(biāo)本及對應(yīng)的12例周圍正常粘膜組織，行雙向凝膠電泳， 所得圖像大部分效果滿意，蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)為590-980之間，大多數(shù)分 布于30-100kd、pH3.5-9區(qū)域，PD-quest 7.3軟件分析正常粘膜 組平均檢測蛋白質(zhì)點(diǎn)873±62個(gè)，APC基因突變組癌組織平均檢出蛋白質(zhì)814±56個(gè)，APC基因正常組癌組織平均檢出蛋白質(zhì)793±48個(gè)。三者之間的

4、合成凝膠兩兩比較，匹配率分別為81.4％、86.3％、84.9％。APC(+)組與APC(一)組比較有9個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)特異或上調(diào)5倍以上，其中有5個(gè)其分?jǐn)?shù)大于63分有顯著意義，分別為B／K蛋白、 pantothenate kinase 2、 A1pha enolase、 Annexin A2、AAH00452(未知蛋白)。APC(一)組與APC(+)組有11個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)上調(diào)或特異，有4個(gè)其分?jǐn)?shù)大于63分有顯著意義，為MHC Class1

5、 antigen、MAPKK4、excision repair protein、角蛋白10。腫瘤組織與正常粘膜組織比較有10個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)上調(diào)或差異，有5個(gè)鑒定分?jǐn)?shù)大于63分有顯著意義為：CDK5蛋白、protein phosphatase1、requlatory subunit 3D、Extracellular signal-related kinase1c、AHH01915L(未知蛋白)、transgelin。 結(jié)論； 本研究成