高脂飼料動(dòng)員CD11b+Gr-1+髓系抑制性細(xì)胞參與動(dòng)脈粥樣化發(fā)病機(jī)制研究.pdf

1、第一部分脂多糖動(dòng)員骨髓CD11b+Gr-1+髓系抑制性細(xì)胞及其吞噬氧化修飾低密度脂蛋白形成泡沫細(xì)胞
　　 目的研究小鼠骨髓來(lái)源的未成熟CD11b+Gr-1+髓系前體細(xì)胞在急性炎性脂多糖(LPS)刺激下動(dòng)員釋放,及其誘導(dǎo)分化成巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞后吞噬氧化修飾低密度脂蛋白(ox-LDL)形成泡沫細(xì)胞。
　　 方法小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)(5μg／g體重),24小時(shí)后采用流式細(xì)胞術(shù)分析骨髓,脾臟,和外周血中CD11b-Gr-1

2、+髓系前體細(xì)胞,CD11b+Gr-1+單核細(xì)胞,和CD11b-Gr-1+粒細(xì)胞的百分比的變化。體外泡沫細(xì)胞形成實(shí)驗(yàn)取小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞以DMEM培養(yǎng)基+胎牛血清(FBS)培養(yǎng),以粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)誘導(dǎo)分化48小時(shí),加入100 mg／L氧化修飾低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育48小時(shí)以形成脂質(zhì)負(fù)荷泡沫細(xì)胞。油紅O染色鑒定泡沫細(xì)胞。
　　 結(jié)果(1)脂多糖(LPS)腹腔注射可以顯著促進(jìn)CD11b+Gr-1+

3、髓系前體細(xì)胞從骨髓動(dòng)員并釋放到外周組織；脾臟和循環(huán)中CD11b+Gr-1+髓系前體細(xì)胞和CD11b+Gr-1-單核細(xì)胞顯著增加。(2)從骨髓分離的CD11b+Gr-1+髓系前體細(xì)胞以粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)誘導(dǎo)分化后形成單核／巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞,繼而加入氧化修飾低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育,可以形成脂質(zhì)負(fù)荷細(xì)胞(泡沫細(xì)胞)。油紅O染色可見(jiàn)泡沫細(xì)胞的胞漿中有紅染的大型脂滴,核被胞漿內(nèi)脂滴擠壓在一側(cè)。
　　 結(jié)論

4、急性炎性刺激脂多糖(LPS)可以動(dòng)員小鼠骨髓CD11b+Gr-1+髓系前體細(xì)胞的向循環(huán)和外周組織釋放。CD11b+Gr-1+髓系前體細(xì)胞可被誘導(dǎo)分化并吞噬氧化修飾低密度脂蛋白形成泡沫細(xì)胞。
　　 第二部分高脂飼料動(dòng)員CD11b+Gr-1+髓系抑制性細(xì)胞參與動(dòng)脈粥樣硬化形成的研究
　　 目的研究高脂飼料飼養(yǎng)ApoE-／-小鼠建立動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型的過(guò)程中CD11b+Gr-1+髓系抑制性細(xì)胞的變化趨勢(shì),以期揭示高脂血癥導(dǎo)致

5、動(dòng)脈粥樣硬化的另一種可能的細(xì)胞機(jī)制。
　　 方法將12只雄性ApoE-／-小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(n=6)和模型組(n=6),分別給予普通飼料與高脂飼料飼喂。8周后酶法和免疫比濁法檢測(cè)血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、載脂蛋白A-I(apoA-I)和載脂蛋白B(apoB)水平;HE染色觀察主動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)改變；油紅O染色觀察內(nèi)皮下間隙脂質(zhì)沉積情況；流式細(xì)胞術(shù)分

6、析骨髓、脾臟、外周血中CD11b+Gr-1+髓系抑制性細(xì)胞的百分比,比較其與對(duì)照組之間的差異度。
　　 結(jié)果8周的高脂飼料使得ApoE-／-小鼠血脂水平顯著改變,動(dòng)脈粥樣硬化斑塊明顯形成,CD11b+Gr-1+髓系抑制性細(xì)胞占骨髓單個(gè)核細(xì)胞比例顯著升高,并進(jìn)一步被動(dòng)員釋放到外周組織；導(dǎo)致循環(huán)中CD11b+Gr-1+髓系抑制性細(xì)胞顯著增加。結(jié)論高脂飼料飼養(yǎng)ApoE-／-小鼠能使CD11b+Gr-1+髓系抑制性細(xì)胞的生成顯著增加,并