阿司匹林抑制兔動脈粥樣斑塊破裂及其機制研究.pdf

1、目的：從體內(nèi)外分別研究阿司匹林增加動脈粥樣斑塊穩(wěn)定性作用及其可能的分子機制，并觀察其發(fā)揮作用的最佳劑量。 方法：體內(nèi)實驗采用雄性新西蘭兔高脂飲食加腹主動脈內(nèi)膜剝脫術(shù)制成高脂性動脈粥樣硬化模型，然后分別給予阿司匹林5-20mg/kg治療4周，實驗?zāi)┱T發(fā)斑塊破裂，運用圖像分析方法觀察阿司匹林對粥樣斑塊破裂處血栓形成面積的影響；利用光鏡觀察破裂斑塊的形態(tài)學(xué)特征；用比濁法檢測血小板聚集性；用免疫組化方法測定巨噬細胞的蛋白表達；原位雜交方

2、法分別測定COX-2mRNA和MMP-2mRNA表達。 體外實驗采用人單核細胞THP-1細胞株，用RPMI1640培養(yǎng)基適應(yīng)性培養(yǎng)后，利用佛波酯促使其分化為巨噬細胞后，分別用含阿司匹林12.5-200μg/ml的培養(yǎng)基孵育24h，用ELISA法分別測定細胞培養(yǎng)上清液中MMP-2、MMP-9、PGE2和PGD2含量；用RT-PCR法分別檢測細胞中MMP-2、MMP-9、PPARα、PPARγ、COX-1、COX-2、mPGES-1

3、和L-PGDSmRNA表達；用Westernblot法分別測定PPARα、PPARγ、NF-κB、mPGES-1和L-PGDS蛋白表達。 結(jié)果： (1)阿司匹林5mg/kg和10mg/kg組可以抑制粥樣斑塊破裂處血栓的形成，且5mg/kg組的作用更明顯。 (2)阿司匹林可以抑制斑塊中泡沫細胞的形成和聚集，使纖維帽尤其是肩部區(qū)的結(jié)構(gòu)保持得較為完整。 (3)阿司匹林5mg/kg和10mg/kg組對ADP或AA

4、誘導(dǎo)的血小板聚集均有較好的抑制作用，當(dāng)劑量增加至20mg/kg時，阿司匹林對血小板的聚集抑制作用反而減弱。 (4)阿司匹林5mg/kg和10mg/kg組可明顯減少斑塊內(nèi)巨噬細胞數(shù)目；阿司匹林也能降低斑塊中COX-2mRNA的表達，且隨著劑量的增加作用增強，在10-20 mg/kg組的作用較為明顯；還能明顯降低粥樣斑塊中MMP-2 mRNA表達，但以阿司匹林5mg/kg組的作用較好。 (5)阿司匹林可抑制THP-1源性巨噬

5、細胞分泌MMP-2和MMP-9，并且降低MMP-2和MMP-9 mRNA表達。 (6)阿司匹林可以通過增加PPARα和PPARγ mRNA和蛋白表達，來抑制NF-κB的蛋白表達。預(yù)先給予PPARα或/和PPARγ拮抗劑后能減弱阿司匹林抑制巨噬細胞源性MMP-9mRNA表達和釋放作用，相反PPARα和PPARγ激動劑能抑制MMP-9的表達和釋放。 (7)阿司匹林還可以通過抑制COX-1和COX-2 mRNA表達，抑制mPG

6、ES-1mRNA和蛋白表達，從而抑制PGE2的釋放而減少PGE2依賴性的MMPs表達。同時阿司匹林亦能增加L-PGDSmRNA和蛋白表達，從而增加PGD2釋放，PGD2的代謝產(chǎn)物15d-PGJ2，能抑制MMP-9的表達和釋放。 (8)上述這些體外實驗結(jié)果均以阿司匹林50μg/ml的濃度較好。 結(jié)論：阿司匹林具有穩(wěn)定動脈粥樣斑塊作用，其機制可能與減少斑塊區(qū)巨噬細胞數(shù)量，以及降低粥樣斑塊中MMPs表達有關(guān)，尤其是阿司匹林可能