急性白血病P16基因甲基化狀態(tài)檢測及EGCG逆轉U937細胞P16基因甲基化的實驗研究.pdf

1、目的：應用巢式甲基特異性PCR法(nested methylation specific PCR，rNSP)和DNA克隆測序檢測成人急性白血病P16基因的甲基化狀態(tài)，探討P16基因甲基化與白血病發(fā)生、發(fā)展可能的關系，從而進一步闡明白血病發(fā)生、發(fā)展的可能機制；探討表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)逆轉人急性白血病U937細胞株P16基因甲基化狀態(tài)及調節(jié)轉錄作用、誘導蛋白重新表達及其可能的機制。 方法：采用INSP和DNA克隆測序

2、檢測成人急性白血病P16基因的甲基化狀態(tài)；采用SRB法檢測EGCG對人白血病細胞系U937細胞增殖、活力的影響；nMSP法檢測藥物作用前后P16甲基化狀態(tài)變化，RT-PCR法檢測P16、甲基轉移酶DNMTl、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA的表達，Westren Blot蛋白免疫印跡法檢測P16蛋白的表達，應用流式細胞儀DNA倍體分析法探討EGCG對U937細胞周期的影響。 結果：1.82例急性白血病(AL)患者P16基因

3、甲基化的出現率為39.0％，其中急性髓系白血病(AML)患者為41.4％，24例急性淋巴細胞白血病(ALL)患者為33.3％，初治AL患者為36.6％而復發(fā)則為54.5％；82例AL患者中有6例P16基因缺失，缺失率為7.3％，AML、ALL分別為1.7％和20.8％；16例健康自愿者或非惡性血液病患者P16基因則未發(fā)生甲基化或缺失；2.與對照組相比，不同濃度EGCG作用后均可抑制細胞增殖、誘導細胞分化，G0-G1期細胞比例增加；3.E

4、GCG作用72h后P16基因甲基化程度明顯減弱，P16基因異常甲基化的現象被逆轉；4．未處理組細胞P16基因不表達，EGCG作用72h后P16基因在mRNA和蛋白水平表達增強；5．與未處理組相比，EGCG作用72h后甲基轉移酶DNMT3A、DNMT3B的表達下降并呈濃度依賴性，而DNMTl表達不受影響。 結論：1.P16基因甲基化在成人急性白血病中有較高的檢測率，且復發(fā)患者檢出率較初治者高，可能與成人急性白血病的發(fā)生發(fā)展密切相關