矮生二裂委陵菜抗2型糖尿病作用機(jī)制研究.pdf

1、采用天然產(chǎn)物化學(xué)分離技術(shù)與α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶和醛糖還原酶體外篩選模型相結(jié)合，篩選矮生二裂委陵菜（Potentilla bifurca var. humilior）中的高活性酶抑制組分。建立2型糖尿病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，研究矮生二裂委陵菜高活性組分對(duì)糖脂代謝和氧化應(yīng)激的影響，并采用RT-PCR技術(shù)對(duì)糖脂代謝關(guān)鍵酶和激素mRNA表達(dá)進(jìn)行測(cè)定，探討矮生二裂委陵菜抗2型糖尿病的作用機(jī)制。
　　1、采用ICP-MS法對(duì)矮生二裂委陵菜中的M

2、g、K、Ca、Cr、Cu、Zn、As、Se、Mo、Cd、Hg和Pb這12種元素含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，與糖脂代謝相關(guān)的Mn（54.76μg/g）、Cr（3.352μg/g）、Se（0.006406μg/g）等微量元素含量高于同類中藥材；重金屬、有害元素Pb、Cd、As、Hg含量均在《中華人民共和國(guó)藥典》和《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的安全標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。
　　2、采用乙醇回流提取，石油醚、乙酸乙酯萃取法，對(duì)矮生二裂委陵菜不

3、同極性部位進(jìn)行提取，并以蘆丁為對(duì)照品，對(duì)總黃酮中黃酮含量進(jìn)行測(cè)定。測(cè)得總黃酮中黃酮含量為50.28％，原植物中總黃酮含量為4.97%。
　　3、建立α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶和醛糖還原酶抑制劑體外篩選模型，分別對(duì)矮生二裂委陵菜3種不同提取物的酶抑制活性進(jìn)行篩選。結(jié)果，矮生二裂委陵菜總黃酮在3種酶抑制中均表現(xiàn)出最高抑制活性，半數(shù)抑制濃度分別為0.273、0.004和0.312 mg/mL。
　　4、采用半數(shù)致死量和最大耐受量實(shí)

4、驗(yàn)對(duì)矮生二裂委陵菜進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)。結(jié)果表明，在最大可灌胃劑量下半數(shù)致死量未測(cè)出，說明矮生二裂委陵菜在小鼠最大可灌胃劑量下毒性較低，最大耐受量為10 g·Kg-1/d。
　　5、采用小鼠糖耐量模型，以矮生二裂委陵菜總黃酮為實(shí)驗(yàn)藥物，觀察矮生二裂委陵菜總黃酮對(duì)淀粉負(fù)荷后的正常小鼠血糖的影響。結(jié)果表明，矮生二裂委陵菜總黃酮高、低劑量組血糖值與空白組相比在淀粉負(fù)荷15min后差異極顯著。表明矮生二裂委陵菜總黃酮能夠提高正常小鼠的耐糖量。

5、
　　6、建立2型糖尿病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，以矮生二裂委陵菜總黃酮為實(shí)驗(yàn)藥物，觀察其對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血糖和糖尿病癥狀的影響。結(jié)果表明，矮生二裂委陵菜總黃酮高、低劑量組給藥14d后降糖率分別為14.08%和9.72%，給藥28 d后的降糖率分別為36.51%和30.86%；與模型組相比矮生二裂委陵菜總黃酮高、低劑量給藥28 d后平均攝食量明顯下降，平均飲水量明顯下降，平均排尿量明顯下降，體重明顯增加。說明矮生二裂委陵菜具有良好的降血糖作用，同時(shí)

6、改善糖尿病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的“三多一少”癥狀。
　　7、建立2型糖尿病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，以矮生二裂委陵菜總黃酮為實(shí)驗(yàn)藥物，探究其抗2型糖尿病作用機(jī)制。結(jié)果表明，與模型組相比矮生二裂委陵菜總黃酮高、低劑量組給藥28 d后血清胰島素含量升高，胰島素抵抗指數(shù)下降；升高血清 SOD、降低血清丙二醛；同時(shí)降低血清總膽固醇、血清甘油三酯、血清低密度脂蛋白。說明矮生二裂委陵菜能夠促進(jìn)胰島素分泌，提高機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性和抗氧化能力，同時(shí)調(diào)節(jié)血脂水平。

7、>　　8、建立2型糖尿病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，以矮生二裂委陵菜總黃酮為實(shí)驗(yàn)藥物，采用熒光半定量 RT-PCR技術(shù)，測(cè)定糖脂代謝關(guān)鍵激素和酶的 mRNA表達(dá)量，采用Livak法對(duì)相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行分析。結(jié)果表明，矮生二裂委陵菜總黃酮高、低劑量組顯著上調(diào)胰島素、葡萄糖激酶mRNA表達(dá)；顯著的下調(diào)葡萄糖-6-磷酸酶mRNA表達(dá)；極顯著的下調(diào)抵抗素、瘦素mRNA表達(dá)。說明矮生二裂委陵菜能夠調(diào)節(jié)多種糖脂代謝相關(guān)激素和酶的表達(dá)，達(dá)到抗2型糖尿病的目的。