人面果口山酮抗糖尿病作用及機(jī)制研究.pdf

1、為了進(jìn)一步開發(fā)利用此少數(shù)民族傳統(tǒng)藥用植物，本文對(duì)人面果口山酮的抗Ⅱ型糖尿病（Type2 Diabetes mellitus，T2DM）活性進(jìn)行了初步研究，并對(duì)其促進(jìn)葡萄糖消耗及改善胰島素抵抗的機(jī)制進(jìn)行了初步探討。
　　本文首先研究了人面果中分離得到的5個(gè)新的口山酮化合物對(duì)HepG2/IR細(xì)胞葡萄糖消耗的影響。采用高劑量的牛胰島素刺激HepG2細(xì)胞的方法誘導(dǎo)建立胰島素抵抗模型（HepG2/IR）。利用MTT法檢測口山酮化合物1~5對(duì)

2、模型細(xì)胞活力的影響。人面果口山酮處理組分為50μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1及400μmol·L-1四個(gè)濃度梯度（化合物3、4最高濃度設(shè)為200μmol·L-1,最低濃度設(shè)為25μmol·L-1）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：各化合物25μmol·L-1濃度處理細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞的存活率在85％以上。因此設(shè)定6.25~25μmol·L-1作為以下實(shí)驗(yàn)的參考濃度范圍。
　　用葡萄糖氧化酶法研究各化合物對(duì)HepG2/IR

3、細(xì)胞葡萄糖消耗的影響。結(jié)果顯示，5個(gè)人面果口山酮化合物的3個(gè)（化合物1、3、4）各濃度組均具有促進(jìn)細(xì)胞葡萄糖消耗的作用，各化合物的作用效果隨著濃度的增加而增強(qiáng)，即呈現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系?；衔?、5促進(jìn) HepG2/IR細(xì)胞的葡萄糖消耗的作用稍弱。其中化合物1高濃度組（25μmol·L-1）和中濃度組（12.5μmol·L-1）效果較好，其葡萄糖的消耗量為8.15±0.04 mmol·L-1和7.56±0.20 mmol·L-1，顯著高于

4、陽性對(duì)照組二甲雙胍（**P<0.01）?；衔?各濃度組中均表現(xiàn)出很好的促進(jìn)葡萄糖消耗的效果，顯著高于陽性對(duì)照二甲雙胍組（***P<0.001）。化合物4各濃度組均不同程度上表現(xiàn)出提高細(xì)胞糖消耗的活性。以上結(jié)果表明，人面果口山酮化合物具有促進(jìn)HepG2/IR糖代謝作用。
　　為探討人面果口山酮化合物促進(jìn)糖代謝的機(jī)制，本文以另一種從人面果中提取的口山酮12b-羥基-去-D-杰氏山竹子素A（12b-hydroxy-des-D-garc

5、igerin A，DGA）為材料，研究了其促進(jìn)細(xì)胞葡萄糖代謝的相關(guān)細(xì)胞信號(hào)途徑。在HepG2/IR細(xì)胞中添加不同濃度的 DGA處理24 h，測定各組細(xì)胞的葡萄糖消耗量、己糖激酶（Hexokinase，HK）和丙酮酸激酶（Pyruvate kinase，PK）活性、胰島素受體（Insulin receptor，InsR）、胰島素受體底物-1（Insulin receptor substrates-1，IRS-1）及磷脂酰肌醇3-激酶（Ph

6、sphatidyl inositol3-kinase，PI3-K）基因mRNA的表達(dá)、以及InsR蛋白及胰島素受體底物-1/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（IRS-1/PI3-K/AKT）信號(hào)通路及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK Thr172）等相關(guān)蛋白的表達(dá)。研究表明，DGA能夠明顯促進(jìn)HepG2/IR細(xì)胞的葡萄糖消耗。DGA亦能增加糖代謝關(guān)鍵酶即HK和PK的活力。高濃度（25μmol·L-1）DGA能明顯提高HepG2/IR

7、細(xì)胞中InsR mRNA的表達(dá)，并呈劑量依賴關(guān)系；中、高濃度組（12.5μmol·L-1及25μmol·L-1）的DGA也能上調(diào)IRS-1 mRNA的表達(dá)；中、高濃度組（12.5μmol·L-1及25μmol·L-1）的DGA亦能明顯提高PI3-K mRNA基因的表達(dá)。此外，DGA促進(jìn)InsR蛋白表達(dá)水平，激活I(lǐng)RS-1/PI3-K/AKT信號(hào)通路，提高IRS-1、p-PI3-K、p-AKT ser473蛋白的表達(dá)水平，促進(jìn)葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)