柚皮苷逆轉(zhuǎn)人卵巢癌耐藥細(xì)胞SKOV3-DDP耐藥性及逆轉(zhuǎn)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　研究柚皮苷對卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞SKOV3/DDP體外增殖的影響及耐藥逆轉(zhuǎn)作用，并初步探討相關(guān)耐藥機(jī)制。
　　方法：
　　1、不同濃度的順鉑(1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml)分別作用于SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞，MTT法測48h后兩種細(xì)胞的增殖抑制率，分別得出IC50，計算得出SKOV3/DDP的耐藥指數(shù)。
　　2、用不同濃度柚皮苷（5μm

2、ol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L）作用于人卵巢癌耐藥細(xì)胞SKOV3/DDP，分別作用24h、48h、72h后，MTT法測定不同藥物濃度組，作用不同時間后對SKOV3/DDP細(xì)胞的抑制率，篩選出非細(xì)胞毒性的柚皮苷濃度。
　　3、非細(xì)胞毒性的柚皮苷聯(lián)合不同濃度的順鉑（DDP）作用48h后,測定柚皮苷聯(lián)合DDP對SKOV3/DDP細(xì)胞的增殖抑制率，計算出半數(shù)抑制濃度IC50，與單獨(dú)DDP作

3、用比較，以此判斷柚皮苷能否增加耐藥細(xì)胞對DDP的敏感性。
　　4、不同實驗組：空白對照組、單獨(dú)柚皮苷組（10μmol/L）、單獨(dú)DDP組（5μg/ml）、柚皮苷（10μmol/L）聯(lián)合DDP（5μg/ml）組，上述分組作用48h后，采用RT-PCR法測定不同實驗組SKOV3/DDP細(xì)胞內(nèi)MDR1mRNA及MRP2mRNA的表達(dá)；westernblot法檢測不同實驗組SKOV3/DDP細(xì)胞內(nèi)P-gp、MRP2蛋白的表達(dá)水平。

4、　　結(jié)果：
　　1、不同濃度的DDP處理SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞48h后,SKOV3細(xì)胞的IC50為5.48μg/ml，SKOV3/DDP細(xì)胞的IC50為14.93μg/ml，耐藥指數(shù)RI為2.72。
　　2、柚皮苷作用于SKOV3/DDP細(xì)胞后的增殖抑制作用隨著濃度的增高而增大，同一濃度作用下，抑制率隨著時間的延長而增大。10μmol/L的柚皮苷作用于SKOV3/DDP細(xì)胞24h、48h、72h后的抑制率（％）分

5、別為3.24±1.18、6.61±0.19、9.53±0.24,柚皮苷作用SKOV3/DDP細(xì)胞48h后，10％的細(xì)胞生長受抑制所需要的柚皮苷濃度IC10為12.66μmol/L。為避免實驗過程中細(xì)胞死亡過多，后續(xù)試驗選取10μmol/L柚皮苷作為實驗用濃度。
　　3、非細(xì)胞毒性的柚皮苷（10μmol/L）聯(lián)合不同濃度的DDP作用48h后,計算得到SKOV3/DDP對DDP的IC50從14.93μg/ml降至8.87μg/ml，發(fā)

6、現(xiàn)SKOV3/DDP對DDP的耐藥指數(shù)明顯降低，RI為1.62,單獨(dú)DDP作用時RI為2.72，由此可得出非細(xì)胞毒性的柚皮苷能部分逆轉(zhuǎn)SKOV3/DDP的耐藥，其逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為1.68。
　　4、SKOV3/DDP細(xì)胞中MDR1mRNA、MRP2mRNA的表達(dá)：與空白對照組比較，單獨(dú)柚皮苷組（10μmol/L）、柚皮苷（10μmol/L）聯(lián)合DDP（5μg/ml）組MDR1mRNA、MRP2mRNA的表達(dá)均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<

7、0.05)，單獨(dú)DDP組（5μg/ml）與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），柚皮苷（10μmol/L）聯(lián)合DDP（5μg/ml）組與單獨(dú)DDP組（5μg/ml）比較，MDR1mRNA、MRP2mRNA表達(dá)明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　5、SKOV3/DDP細(xì)胞中P-gp和MRP2蛋白的表達(dá)：單獨(dú)柚皮苷組（10μmol/L）、柚皮苷（10μmol/L）聯(lián)合DDP（5μg/ml）組分別與空白對照組

8、比較，蛋白表達(dá)均明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，單獨(dú)DDP組（5μg/ml）與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），柚皮苷（10μmol/L）聯(lián)合DDP（5μg/ml）組與單獨(dú)DDP組（5μg/ml）比較P-gp、MRP2蛋白的表達(dá)均明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　柚皮苷對卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞SKOV3/DDP的體外增殖具有明顯抑制作用，并能增強(qiáng)SKOV3/DDP細(xì)胞對