透骨消痛膠囊干預(yù)骨性關(guān)節(jié)炎軟骨退變的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)觀察透骨消痛膠囊對(duì)大鼠骨性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨病理改變以及對(duì)退變軟骨細(xì)胞自噬中的LC3Ⅰ/Ⅱ，ULK1，Beclin1表達(dá)的影響，探討透骨消痛膠囊對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎軟骨退變的作用機(jī)制。
　　方法：
　　44只SD大鼠，采用抽簽法將SD大鼠隨機(jī)分為2組，造模組33只，正常組11只。造模組采用木瓜蛋白酶注射制備大鼠骨性關(guān)節(jié)炎模型，前期課題組已經(jīng)鑒定模型制備成功。按抽簽法將造模成功的造模組大鼠隨機(jī)分為3組，每組11只，分

2、別為:透骨消痛膠囊組、葡萄糖胺組、模型組。正常組和模型組生理鹽水灌胃。透骨消痛膠囊組用透骨消痛膠囊水溶液灌胃。葡萄糖胺組用葡萄糖胺水溶液灌胃，每天給藥1次，連續(xù)給藥12周。灌胃干預(yù)12周后，將所有動(dòng)物處死，拍攝左膝關(guān)節(jié)X線片并取軟骨組織待測(cè)，同時(shí)用光鏡、掃描電鏡、透射電鏡、進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察，Westernblot檢測(cè)軟骨LC3Ⅰ/Ⅱ、ULK1、Beclin1的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.X片觀察結(jié)果模型組:膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)間隙明

3、顯變窄，關(guān)節(jié)面硬化，股骨內(nèi)髁、脛骨平臺(tái)內(nèi)側(cè)緣及關(guān)節(jié)邊緣有明顯骨贅形成。透骨消痛膠囊組:膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)間隙變窄，但較模型組改變輕，關(guān)節(jié)面輕微硬化，關(guān)節(jié)邊緣有輕微骨贅形成，軟骨下骨骨密度稍增高。與模型組相比，透骨消痛膠囊組、葡萄糖胺組大鼠膝關(guān)節(jié)總體形態(tài)變化有明顯差異。
　　2.軟骨掃描電鏡結(jié)果正常組:關(guān)節(jié)軟骨表面光滑，呈典型的壟溝樣結(jié)構(gòu)，無(wú)軟骨細(xì)胞和膠原裸露。模型組:軟骨表面膠原纖維裸露，形成流水沖蝕樣改變，膠原纖維網(wǎng)增粗、斷裂、剝落，圓

4、形突起增多，軟骨面壟形結(jié)構(gòu)完全消失，表面粗糙，軟骨細(xì)胞隱窩完全暴露，完整的網(wǎng)架結(jié)構(gòu)完全消失。透骨消痛膠囊組:表層膠原纖維裸露，排列較不規(guī)則，有的軟骨細(xì)胞的隱窩暴露在殘余的膠原纖維之間。與模型組相比，葡萄糖胺組、透骨消痛膠囊組軟骨表面的損傷程度有明顯差異，正常組較模型組脛骨平臺(tái)保持良好的完整性并具有光滑的輪廓，有顯著差異。
　　3.蕃紅O-固綠染色觀察結(jié)果正常組:關(guān)節(jié)軟骨表面光滑，四層結(jié)構(gòu)清晰，軟骨細(xì)胞排列整齊，未見(jiàn)軟骨細(xì)胞簇聚，由

5、淺入深可分為表淺層、移行層（中間層）、深層（放射層）、鈣化層，潮線完整，染色質(zhì)分布均勻，細(xì)胞核清晰，染色均勻。模型組:關(guān)節(jié)軟骨表面粗糙，部分軟骨細(xì)胞核萎縮、壞死，鈣化層軟骨細(xì)胞聚集，排列不規(guī)則，四層結(jié)構(gòu)不易區(qū)分，潮線多不完整或完全消失，甚至軟骨下骨暴露及囊變形成。透骨消痛膠囊組:關(guān)節(jié)軟骨表面不甚光滑，四層結(jié)構(gòu)仍然可以區(qū)分，軟骨層輕微變薄，中間層細(xì)胞和深層細(xì)胞輕度增生，可染蛋白多糖染色變淺，軟骨細(xì)胞排列規(guī)則，同時(shí)可見(jiàn)增生軟骨細(xì)胞呈巢狀，潮

6、線完整。與正常組相比，模型組脛骨平臺(tái)軟骨具有明顯的組織學(xué)變化。與模型組相比，透骨消痛膠囊組、葡萄糖胺組脛骨平臺(tái)軟骨組織變學(xué)化，有明顯的差異。透骨消痛膠囊組、葡萄糖胺組和模型組的Mankin軟骨評(píng)分均顯著高于正常組(P＜0.01)，透骨消痛膠囊組和葡萄糖胺組的Mankin軟骨評(píng)分均顯著低于模型組(P＜0.01)。
　　4.透射電鏡觀察:模型組與正常組對(duì)比，軟骨細(xì)胞及骨細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)對(duì)比差異明顯。與模型組相比，透骨消痛膠囊組、葡萄糖胺組

7、軟骨和軟骨下骨退化并不十分嚴(yán)重。
　　5.Westernblot檢測(cè)軟骨LC3Ⅰ/Ⅱ、ULK1、Beclin1的表達(dá):模型組LC3Ⅰ/Ⅱ，ULK1和Beclin1蛋白的表達(dá)明顯低于正常組（P＜0.01）。透骨消痛膠囊組，葡萄糖胺組LC3Ⅰ/Ⅱ，ULK1和Beclin1蛋白的表達(dá)明顯高于模型組（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.透骨消痛膠囊可通過(guò)改善軟骨下骨膠原纖維和鈣磷結(jié)晶的排列，抑制潮線復(fù)制，從而延緩關(guān)節(jié)軟骨的退