透骨消痛膠囊對退變軟骨細胞增殖影響的實驗研究.pdf

1、目的：觀察透骨消痛膠囊含藥血清對正常及退變軟骨細胞增殖速率和細胞周期分布的影響，從細胞學的角度上探討透骨消痛膠囊對正常及退變軟骨細胞增殖的干預作用。
　　 方法：1.含藥血清及不含藥血清的制備：取健康六月齡新西蘭大白兔16只，雌雄各半，隨機分成2組，即模型組與給藥組。給藥組予以透骨消痛膠囊水溶液灌胃，模型組則以等量的生理鹽水灌胃。取模型組與給藥組動物血清制備含透骨消痛膠囊含藥血清和不含藥血清。
　　 2.含藥血清和不含藥

2、血清培養(yǎng)第3代軟骨細胞：取健康六月齡新西蘭大白兔16只，雌雄各半，隨機分成2組，即正常組與造模組，通過改良Hulth法，對造模組動物實施造模手術。喂養(yǎng)1周后，開始強迫造模組兔每日活動1次，每次1h。8周后處死動物，分離并培養(yǎng)正常組和造模組動物軟骨細胞，培養(yǎng)至第三代，用甲苯胺藍染液對其進行鑒定。取第3代正常及退變軟骨細胞用含藥血清與不含藥血清進行培養(yǎng)，分為A組（正常軟骨細胞不含藥血清組）、B組（正常軟骨細胞含藥血清組）、C組（退變軟骨細胞

3、不含藥血清組）、D組（退變軟骨細胞含藥血清組）。用光鏡對增殖的軟骨細胞進行組織形態(tài)學觀察，MTT法測細胞相對數(shù)，用流式細胞儀測軟骨細胞周期分布。
　　 結果：1.倒置顯微鏡觀察血清培養(yǎng)后的正常及退變軟骨細胞形態(tài)，增殖后的正常軟骨細胞呈多角形或長梭形，細胞核清晰；增殖后的退變軟骨細胞呈多角形或長梭形，部分細胞核固縮，有的偏向一側。
　　 2.MTT檢測顯示，各組軟骨細胞增殖速度B組>A組>D組>C組，其中B組>A組（P<0

4、.05），B組>C組（P<0.05），B組>D組（P<0.05），A組>C組（P<0.05），A組>D組（P<0.05），D組>C組（P<0.05）。
　　 3.流式細胞儀檢測顯示，各組軟骨細胞周期分布隨著時間的變化以及血清干預而發(fā)生變化。干預24、48、72h，B組含藥血清S、G2/M期比例上升及PI升高高于同期A組不含藥血清（P<0.05），D組含藥血清S、G2/M期比例上升及PI升高高于同期C組（P<0.05），C、D組退