肺腺癌腫瘤相關(guān)抗原的篩選鑒定及克隆表達(dá).pdf

1、授予單位代碼學(xué)號或申請?zhí)柮芗夃嵵荽髮W(xué)博士學(xué)位論文論文題目：作者姓名：學(xué)科門類：專業(yè)名稱：導(dǎo)師姓名、職稱：1045920032079肺腺癌腫瘤相關(guān)抗原的篩選鑒定及克隆表達(dá)楊繼要醫(yī)學(xué)病理學(xué)與病理生理學(xué)吳逸明教授三零零六年五月鄭州大學(xué)2006屆博士畢業(yè)論文肺腺癌腫瘤相關(guān)抗原的篩選鑒定及克隆表達(dá)12以分析型蛋白上樣量雙向電泳(7cmpH3一10IPG膠條)分離兩例肺腺癌組織的可溶性總蛋白，銀染，得到分析型雙向電泳凝膠圖譜作為標(biāo)準(zhǔn)參比膠，用Gs8

2、00圖像掃描儀獲取凝膠圖像，PDQuest圖像分析軟件分析圖像，得出兩例肺腺癌組織參比凝膠中蛋白質(zhì)點的一致率。13以制備型蛋白上樣量制備兩例肺腺癌組織可溶性總蛋白雙向電泳的轉(zhuǎn)膜凝膠(7cmpH310IPG膠條)，轉(zhuǎn)膜后分別與三組肺腺癌混合血清及一組對照混合血清孵育，經(jīng)羊抗人lgG二抗反應(yīng)和DAB試劑盒顯色后得到肺腺癌組織與肺腺癌血清及對照混合血清Wstemblo劬lg反應(yīng)圖譜，用GS800圖像掃描儀獲取wjstemblotting反應(yīng)圖

3、譜及轉(zhuǎn)膜后凝膠的銀染圖像，經(jīng)PDQuest圖像分析軟件及人工比對，找出NC膜上差異反應(yīng)蛋白點并在參比凝膠上定位。14將反應(yīng)差異蛋白點從制備型凝膠(17cmpH310，58IPG膠條)上挖下，膠內(nèi)酶解后，經(jīng)基質(zhì)輔助電離解吸飛行時間質(zhì)譜(MALDIToFd“S)獲得肽質(zhì)量指紋圖譜(PMF)，采用生物信息學(xué)手段搜索蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，鑒定蛋白質(zhì)性質(zhì)，作為肺腺癌腫瘤相關(guān)抗原的候選蛋白。2肺腺癌腫瘤相關(guān)抗原的克隆、表達(dá)及抗原性的初步鑒定21采用逆轉(zhuǎn)錄P

4、cR(RTPcR)方法從肺腺癌組織總IⅢA擴增出兩種腫瘤相關(guān)抗原候選蛋白(TmP1和CAPZAl)的全基因編碼序列。22用內(nèi)切酶Ndd和ⅪloI雙酶切PCR產(chǎn)物，和同樣經(jīng)過酶切的表達(dá)載體pET30a()連接，CaCl2法轉(zhuǎn)化DH5c【菌株，酶切以及PCR方法篩選、鑒定重組子，并進一步的序列測定驗證插入序列是否正確。23將構(gòu)建正確的重組表達(dá)質(zhì)粒pEm30a()T和pET30a()c導(dǎo)入BL21菌株，IPlb誘導(dǎo)表達(dá)，sDs聚丙烯酰胺電泳(