人肺腺癌多藥耐藥細(xì)胞差異表達(dá)基因的克隆與初步鑒定.pdf

1、該研究采用大劑量沖擊和逐步增加劑量相結(jié)合的方式,以順鉑為誘導(dǎo)藥物,人肺腺癌細(xì)胞系SPC-A-1為誘導(dǎo)對(duì)象,經(jīng)過(guò)192d的誘導(dǎo),建立了人肺腺癌多藥耐藥細(xì)胞系SPC-A-1/CDDP.MTT結(jié)果表明該細(xì)胞系對(duì)順鉑、5-氟尿嘧啶、絲裂霉素、長(zhǎng)春新堿、和足葉乙甙等藥物有不同程度的耐藥性.生長(zhǎng)曲線、倍增時(shí)間、形態(tài)學(xué)和常規(guī)染色體檢測(cè)顯示SPC-A-1/CDDP細(xì)胞性狀穩(wěn)定,是可靠的人肺腺癌多藥耐藥細(xì)胞系,可應(yīng)用于下游實(shí)驗(yàn),同時(shí)提示大劑量沖擊和逐步增

2、加劑量相結(jié)合可縮短藥物誘導(dǎo)時(shí)間.在成功誘導(dǎo)建立肺腺癌多藥耐藥細(xì)胞系的基礎(chǔ)上,應(yīng)用抑制消減雜交(SSH),以肺腺癌多藥耐藥細(xì)胞SPC-1-A/CDDP cDNA為實(shí)驗(yàn)方(Tester),以肺腺癌細(xì)胞SPC-1-A cDNA為對(duì)照方(Driver),結(jié)合T/A克隆技術(shù)構(gòu)建了肺腺癌多藥耐藥細(xì)胞差異表達(dá)消減cDNA文庫(kù),經(jīng)斑點(diǎn)雜交篩選獲得21個(gè)SPC-A-1/CDDP細(xì)胞差異表達(dá)cDNA片段.研究表明SSH技術(shù)是篩選新基因的有效方法,2個(gè)新的c