母鼠孕前慢性應激對哺乳后母鼠及其子代行為學和神經(jīng)生物學影響.pdf

1、背景與目的：
　　近年來，對孕期慢性應激研究的比較多，它可能會對母體本身以及子代產(chǎn)生負性的影響，許多研究指出孕期應激和抑郁會增加母體產(chǎn)后抑郁的發(fā)生率，孕期應激和抑郁會造成許多不良的妊娠結局，如產(chǎn)前生長延遲、早產(chǎn)、產(chǎn)后低體重兒等，孕期應激還增加子代情感障礙的發(fā)生，許多動物實驗表明孕期應激與子代增多的抑郁樣行為和焦慮樣行為有關。孕期應激和抑郁可能通過影響HPA軸的功能、5-HT系統(tǒng)和海馬區(qū)的細胞再生對子代產(chǎn)生影響。然而對母體孕前慢性應

2、激和抑郁對子代的行為學和相關神經(jīng)生物學機制的影響的研究還較少。
　　大腦海馬對應激和增加的糖皮質(zhì)激素很敏感，容易受影響。大量的臨床研究證實應激可以抑制海馬神經(jīng)再生，腦內(nèi)海馬區(qū)新生神經(jīng)元的產(chǎn)生減少會導致抑郁癥發(fā)生，而抗抑郁藥能夠促進海馬神經(jīng)元再生。
　　本研究擬通過母鼠孕前慢性應激抑郁模型探討母鼠及其子代行為學和海馬區(qū)神經(jīng)元再生的變化，以及海馬神經(jīng)元再生與子代行為學變化的關系。
　　材料與方法：
　　從汕頭大學醫(yī)學

3、院實驗動物中心（汕頭，中國）取2月齡性成熟期的雌性Spraguedawley（SD）大鼠，體重180g-220g，適應性飼養(yǎng)一周室溫保持在22±1℃、12h：12h光照-黑暗循環(huán)、自由進食水。慢性應激：將大鼠隨機分為四組分別為孕前慢性應激+妊娠組（CUS+Pre）12只、孕前慢性應激+非妊娠組（CUS）12只、非應激+妊娠組（CUS+Pre）10只、非應激組+非妊娠組（CON）10只。非應激+妊娠組和非應激+不孕組大鼠每日單籠飼養(yǎng)，應激

4、+妊娠組和應激+非妊娠組按照21d慢性不可預見性應激方案執(zhí)行，為保證應激的不可預見性，應激的種類隨機安排并且最后是禁食、禁水，單籠飼養(yǎng)。大鼠生產(chǎn)繁殖和子代飼養(yǎng)：慢性應激10天后采用一雄多雌（1:3）間隔同居法繁殖，即每天20:00合籠進行交配，次日8:00分開單籠飼養(yǎng)，每日以此方法直至懷孕（以觀察到明顯的腹部隆起為準），子鼠出生后由其母哺乳喂養(yǎng)，生后22d斷奶，分別取哺乳后母鼠、1月齡和2月齡的子鼠進行行為學實驗。由于子代雄鼠數(shù)量少，故

5、雄性子鼠僅分配到2月齡組。大鼠處死前，腹腔注射BrdU，100mg/Kg，每間隔2h注射一次，共注射4次，最后一次注射兩小時后以生理鹽水和4％多聚甲醛心臟灌注，取腦組織制作冰凍切片，檢測子代鼠大腦海馬神經(jīng)前體細胞的增殖，實驗數(shù)據(jù)應用Excel2003和SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，統(tǒng)計結果以均數(shù)±標準差（`x_±SD）表示，采用單因素方差分析、t檢驗、重復測量的方差分析和非參數(shù)檢驗進行比較，以P≤0.05為差別有統(tǒng)計學意義，P≤

6、0.01為差別有高度統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.開場試驗
　　1.1母鼠
　　母鼠應激后應激組與非應激組相比總路程、中央路程、周邊路程差別有統(tǒng)計學意義（P≤0.05,獨立樣本T檢驗），應激組總路程、中央路程、周邊路程增加。
　　母鼠哺乳期過后應激+妊娠組、應激+非妊娠組、非應激+妊娠組和非應激+非妊娠組各組總路程相比差異有統(tǒng)計學意義（P≤0.05，ANOVA），應激+妊娠組與非應激+妊娠組總路程相比差

7、別有統(tǒng)計學意義（P≤0.05，ANOVA），總路程增加；應激+非妊娠組與應激+妊娠組總路程相比差別有統(tǒng)計學意義（P≤0.05，ANOVA），總路程增加；應激+非妊娠組與非應激+妊娠組總路程相比差別有高度統(tǒng)計學意義（P≤0.01，ANOVA），總路程明顯增加；非應激+非妊娠組與非應激+妊娠組相比總路程差別有統(tǒng)計學意義（P≤0.05，ANOVA），總路程增加；應激+非妊娠組與非應激+非妊娠組總路程相比差別有統(tǒng)計學意義（P≤0.05，ANOV

8、A），總路程增加。
　　1.2子鼠
　　一月齡雌鼠應激+妊娠組與非應激+妊娠組總路程、中央路程和周邊路程相比無統(tǒng)計學意義（P>0.05，獨立樣本T檢驗）。
　　二月齡應激+妊娠組雌鼠與雄鼠總路程、周邊路程相比差別有統(tǒng)計學意義（P≤0.05，ANOVA），總路程和周邊路程增加；應激組雌鼠與非應激組雄性相比差別有統(tǒng)計學意義（P≤0.05，ANOVA），總路程和周邊路程增加。
　　2.蔗糖水消耗試驗
　　2.1母

9、鼠
　　母鼠應激后，應激組和非應激組相比蔗糖水消耗量差異有統(tǒng)計學意義（P≤0.05，獨立樣本T檢驗），應激組的消耗量低于非應激組；蔗糖水消耗百分比差異有高度統(tǒng)計學意義（P≤0.01，獨立樣本T檢驗），應激組的消耗百分比明顯的低于非應激組。
　　母鼠哺乳結束之后后應激+妊娠組、應激+非妊娠組、非應激+妊娠組和非應激+非妊娠組各組相比蔗糖水消耗量、蔗糖水消耗百分比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05，ANOVA）。
　　2.2子

10、鼠
　　一月齡子代雌性鼠應激+妊娠組和非應激+妊娠組相比蔗糖水消耗量、蔗糖水消耗百分比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05，獨立樣本T檢驗）。
　　二月齡子代鼠應激+妊娠組的雌鼠和雄鼠與非應激+妊娠組的雌鼠和雄鼠相比蔗糖水消耗量、蔗糖水消耗百分比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05，ANOVA）。
　　3.強迫游泳實驗
　　3.1母鼠
　　母鼠應激后應激組與非應激組相比5min的強迫游泳中不動時間明顯增加，差別有統(tǒng)計學

11、意義（P≤0.05，獨立樣本T檢驗）。
　　4.水迷宮實驗
　　4.1母鼠
　　母鼠應激后應激組與非應激組穿越平臺次數(shù)相比差別有統(tǒng)計學意義（P≤0.05，獨立樣本T檢驗），穿越平臺次數(shù)增加。母鼠哺乳期結束后應激+妊娠組、應激+非妊娠組、非應激+妊娠組和非應激+非妊娠組相比穿越平臺的次數(shù)差別無統(tǒng)計學意義（P>0.05，ANOVA）。
　　4.2子鼠
　　一月齡雌鼠應激+妊娠組和非應激+妊娠組相比穿越平臺的次數(shù)

12、差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05，獨立樣本T檢驗）。二月齡子代鼠應激+妊娠組的雌鼠和雄鼠與非應激+妊娠組的雌鼠和雄鼠相比穿越平臺的次數(shù)差別無統(tǒng)計學意義（P>0.05，ANOVA）。
　　5.免疫組織化學
　　5.1二月齡子鼠
　　應激組雌鼠、應激組雄鼠、非應激組雌鼠、非應激組雄鼠4組相比較腦組織單位海馬齒狀回面積內(nèi)BrdU陽性細胞數(shù)差別沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05，ANOVA）。
　　結論：
　　1、孕前21

13、d慢性不可預測性應激致母鼠產(chǎn)生焦慮樣行為、抑郁樣行為，提示不良應激是焦慮癥和抑郁癥主要的誘因之一；母鼠產(chǎn)后22d抑郁樣行為消失，而焦慮樣行為仍然存在，提示應激所致的焦慮樣行為持續(xù)時間較長。
　　2、我們推斷雌激素等性激素在空間記憶保持的過程中起重要的作用，應激所致空間記憶的變化在哺乳結束后恢復正常。
　　3、應激對子鼠的行為學未產(chǎn)生明顯的影響，但是在二月齡子鼠在焦慮樣行為中所表現(xiàn)出的雌雄差異，提示成年后性激素在焦慮癥的病因?qū)W