重組腺病毒介導(dǎo)的4-1BBIg基因治療延長(zhǎng)小鼠同種心臟移植物存活的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、移植排斥反應(yīng)的實(shí)質(zhì)是同種反應(yīng)性T細(xì)胞識(shí)別同種抗原后發(fā)生的細(xì)胞免疫應(yīng)答，其機(jī)制為：移植術(shù)后，供、受者來源的DC可遷移至受者外周免疫器官，通過直接或間接識(shí)別途徑，向受者同種反應(yīng)性T細(xì)胞提呈同種抗原，并使之激活，進(jìn)而誘導(dǎo)針對(duì)同種抗原的免疫應(yīng)答。因此，通過基因治療干預(yù)DC與同種反應(yīng)性T細(xì)胞間的相互作用，有可能成為防治移植排斥反應(yīng)的有效策略。迄今，多數(shù)干預(yù)策略的原理是阻斷同種免疫應(yīng)答中DC和T細(xì)胞間的共刺激途徑，使T細(xì)胞因缺乏共刺激信號(hào)而失能(a

2、nergy)或凋亡。 參與T細(xì)胞活化的共刺激分子主要包括兩類，即免疫球蛋白超家族(IgSF)成員和腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)成員。研究顯示，單獨(dú)由IgSF共刺激分子(如CD28/B7)啟動(dòng)的信號(hào)，并不能持續(xù)激活T細(xì)胞，也不能形成記憶性T細(xì)胞，還需TNFRSF共刺激分子參與。屬于TNFRSF的T細(xì)胞共刺激分子包括OX40、4-1BB、CD27、CD30和HVEM，均屬Ⅰ型跨膜蛋白。其中，CD27和HVEM組成性表達(dá)于n

3、aYveT細(xì)胞表面；OX40、4-1BB和CD30在T細(xì)胞識(shí)別抗原數(shù)小時(shí)后誘導(dǎo)性表達(dá)。 4-1BB于1989年在篩選活化T細(xì)胞cDNA文庫(kù)時(shí)被發(fā)現(xiàn)，其并不組成性表達(dá)于靜止T細(xì)胞表面，而僅表達(dá)于活化CD4+T、CD8+T和NK細(xì)胞等表面。最新研究表明，4-1BB也可表達(dá)于DC、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞表面。4-1BB的配體表達(dá)于活化的APC(如DC、B細(xì)胞和單核/巨噬細(xì)胞)表面。根據(jù)4-1BB與4-1BBL所分別表達(dá)的細(xì)胞類型，提示4

4、-1BB可能參與固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的多個(gè)階段。近期研究顯示，與CD40相同，4-1BB也是參與DC活化的分子之一。通過啟動(dòng)4-1BB信號(hào)途徑，可誘導(dǎo)DC產(chǎn)生IL-6和IL-12等，同時(shí)上調(diào)共刺激分子B7-1和B7-2表達(dá)。與CD40/CD40L信號(hào)途徑的不同之處是，CD40信號(hào)的啟動(dòng)有賴于活化T細(xì)胞提供配體(CD40L)，而啟動(dòng)DC表面4-1BB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的配體可能來源于鄰近的APC或DC自身。因此，4-1BB的生物學(xué)功能不僅限于參

5、與T細(xì)胞活化。研究發(fā)現(xiàn)：B7/CD28共刺激信號(hào)主要在T細(xì)胞活化的前期起作用，可促進(jìn)T細(xì)胞增殖并維持其短期存活；4-1BB/4-1BBL信號(hào)通路主要在免疫應(yīng)答后期被啟動(dòng)，可維持T細(xì)胞活化，并是CD8+T細(xì)胞存活和記憶性細(xì)胞形成的必需條件。免疫應(yīng)答過程中，尤其在CD28分子表達(dá)缺陷或功能障礙的情況下，4-1BB/4-1BBL通路可能在提供共刺激信號(hào)中發(fā)揮極為重要的作用。 結(jié)論 1.借助大腸桿菌BJ5183同源重組及AdEa

6、sy載體系統(tǒng)，成功制備攜帶小鼠4-1BB胞外段和人IgGFc融合基因的復(fù)制缺陷型重組腺病毒Ad4-1BBlg，國(guó)內(nèi)外均未見相關(guān)報(bào)道。 2.在成功制備Ad4-1BBlg重組腺病毒的基礎(chǔ)上，初步探討其干預(yù)移植排斥反應(yīng)的作用及機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：Ad4-1BBlg可抑制同種反應(yīng)性T細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子分泌、抑制CD8+的IFN-γ+細(xì)胞產(chǎn)生、抑制單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)移植物，并有效延長(zhǎng)小鼠同種移植心臟存活時(shí)間。本課題研究成果可望為干預(yù)移植排斥反應(yīng)提