重組復(fù)制缺陷型腺病毒載體介導(dǎo)的VEGFcDNA基因治療缺血皮瓣的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討局部應(yīng)用重組復(fù)制缺陷型腺病毒為載體介導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Ad-VEGF)基因治療大鼠背部隨意皮瓣生存的影響及最佳的注射層次。 方法:選用40只SD大鼠，體重350g-400g，普通級(jí)，雌雄不論，以標(biāo)準(zhǔn)全價(jià)飼料在實(shí)驗(yàn)室分籠喂養(yǎng)，以使其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。將大鼠隨機(jī)分成4組，每組10只，以2．5％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(40mg／kg)。四肢固定后，背部8％硫化鈉脫毛、消毒。于大鼠背部正中設(shè)計(jì)蒂在尾側(cè)的隨意皮瓣，皮瓣的長(zhǎng)

2、寬為8cm×2cm，蒂部位于髂棘水平。皮瓣掀起后即刻作如下處理：于皮瓣遠(yuǎn)端選擇4個(gè)對(duì)稱的注射位點(diǎn)，空白對(duì)照組皮瓣掀起后立即原位縫合，Ad-VEGFl組皮瓣掀起后用微量注射器自皮瓣遠(yuǎn)端經(jīng)組織面向皮下注入108pfu重組復(fù)制缺陷腺病毒Ad-VEGF，每一位點(diǎn)注入0．25m1．(10apfu重組復(fù)制缺陷腺病毒用生理鹽水稀釋至1m1)。Ad-VEGF2治療組(受床下給藥組)：皮瓣掀起后立即原位縫合，經(jīng)皮垂直進(jìn)針，有落空感后，繼續(xù)垂直進(jìn)針約1mm

3、，將藥物注入受區(qū)下，劑量同Ad-VEGFl組。Ad-VEGF3治療組(受床給藥組)：皮瓣掀起后立即原位縫合，經(jīng)皮垂直進(jìn)針，有落空感后，將注射部位皮膚提起，使之與受區(qū)形成一定的空隙，將針退至空隙內(nèi)，將藥物注入受區(qū)表面，劑量同Ad-VEGFl組。術(shù)后觀察7天，將動(dòng)物無(wú)痛處死，觀察皮瓣的成活情況，測(cè)量皮瓣的成活面積、計(jì)算成活率、并采集組織行免疫組化、組織學(xué)觀察等。 結(jié)果:對(duì)照組皮瓣成活率為(52．24_+1．87％)Ad-VEGFl組

4、為(74．56_+1．70％)，Ad-VEGF2組為(74．12±1．17％)，Ad-VEGF3組為(72．52_+1．18)，治療組與對(duì)照組有顯著差異性(P<0．01)，而治療組間Ad-VEGFl組、Ad-VEGF2組皮瓣成活率較Ad-VEGF3組高，但無(wú)顯著差異性(P>0．05)。免疫組化顯示基因轉(zhuǎn)染組毛細(xì)血管周圍VEGF沉積，組織切片微血管密度，單位面積微血管計(jì)數(shù)明顯高于對(duì)照組。 結(jié)論:皮瓣內(nèi)、受區(qū)下及受區(qū)表面注射重組復(fù)制