抗老年癡呆癥藥“定志小丸”的研制和遠(yuǎn)志酸及其類似物的分離.pdf

1、隨著我國(guó)社會(huì)已進(jìn)入人口老齡化階段，老年癡呆癥(AD)的發(fā)病率也逐年增高，目前，全世界老年性癡呆癥患者人約有5000萬(wàn)人，并且不斷趨于年輕化，該病的病因目前尚無(wú)確切定論，發(fā)病機(jī)理有多種假說(shuō)，老年性癡呆癥不僅是一個(gè)醫(yī)學(xué)難題，而且將成為一個(gè)突出的社會(huì)問(wèn)題。 “定志小丸”(DX-9386)源于唐代藥王孫思邈的《備急千金方》。處方由人參、茯苓、石菖蒲和遠(yuǎn)志四味中藥組成，四藥合用，共奏補(bǔ)養(yǎng)心脾、祛痰化濕、益智定志之功，為中醫(yī)治療老年癡呆癥的

2、基礎(chǔ)方劑。原方為大蜜丸劑，日服用量大，不便服用，采用現(xiàn)代工藝方法，對(duì)其進(jìn)行了中藥現(xiàn)代化研究。 現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，方中藥材起作用的有效成分為人參皂苷、遠(yuǎn)志皂苷、人參多糖、茯苓多糖和石菖蒲的揮發(fā)油等成分。根據(jù)這些成分的性質(zhì)，結(jié)合祖國(guó)中醫(yī)理論，我們以總多糖和總皂苷的含量為指標(biāo)，結(jié)合藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果，通過(guò)L<,9>(3)<'4>正交試驗(yàn)，確立了“定志小丸”的提取工藝，并利用醇沉和大孔樹(shù)脂柱層析進(jìn)行純化，降低了出膏率，最大限度地提出了有效成

3、分，提高了有效成分的含量，制定了穩(wěn)定可控的工藝控制指標(biāo)，并進(jìn)行了初步的藥效學(xué)試驗(yàn)。 遠(yuǎn)志酸是2005年版中國(guó)藥典遠(yuǎn)志含量測(cè)定的法定對(duì)照品，但目前國(guó)內(nèi)無(wú)對(duì)照品供應(yīng)。為制定“定志小丸”質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的需要，從遠(yuǎn)志總皂苷的水解產(chǎn)物中分離得到了遠(yuǎn)志酸及其三個(gè)類似物，經(jīng)光譜鑒定與遠(yuǎn)志酸結(jié)構(gòu)一致，純度檢查含量均在98％以上，達(dá)到了中藥對(duì)照品要求。 目的：研究“定志小丸”的提取純化工藝，制定工藝質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行初步的藥效學(xué)試驗(yàn)。遠(yuǎn)志藥材水

4、解產(chǎn)物的分離，制備遠(yuǎn)志酸對(duì)照品，為新藥申報(bào)提供對(duì)照品。 方法： 第一部分 ①“定志小丸”提取工藝研究：按照中國(guó)藥典(2005年版、)標(biāo)準(zhǔn)，選用合格藥材，通過(guò)單因素對(duì)比試驗(yàn)，確定石菖蒲揮發(fā)油提取條件；以總多糖、總皂苷、出膏率及藥效學(xué)結(jié)果為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行綜合評(píng)分，確定提取溶劑；在全方提取條件優(yōu)化中首先通過(guò)單因素試驗(yàn)考察提取次數(shù)，然后通過(guò)L<,9>(3<'4>)正交試驗(yàn)，考察提取時(shí)間、溶劑倍數(shù)和稀醇濃度的影響，最終確定

5、最佳工藝參數(shù)。 ②“定志小丸”除雜工藝研究：通過(guò)L<,9>(3<'4>)正交試驗(yàn)優(yōu)化醇沉條件，對(duì)“定志小丸”提取液進(jìn)行第一次醇沉除雜；通過(guò)大孔樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附試驗(yàn)，選擇大孔樹(shù)脂型號(hào)，考察大孔樹(shù)脂吸附容量、上樣濃度、洗脫溶劑及溶劑用量，確定大孔樹(shù)脂純化工藝參數(shù)，利用大孔樹(shù)脂對(duì)醇沉后的提取液進(jìn)行二次除雜。 ③建立“定志小丸”提取、除雜工藝質(zhì)量控制指標(biāo)：可見(jiàn)-紫外分光光度法測(cè)定總多糖和總皂苷。 ④“定志小丸”初步藥效學(xué)試驗(yàn)

6、：以小鼠跳臺(tái)試驗(yàn)和生化指標(biāo)SOD、AChE、MDA為指標(biāo)，評(píng)價(jià)提取物對(duì)老齡小鼠的抗氧化、益智作用。 第二部分 單體成分的提取、分離和結(jié)構(gòu)鑒定：遠(yuǎn)志藥材用稀醇提取，正丁醇萃取，大孔吸附樹(shù)脂富集得到總皂苷，總皂苷酸水解后，用硅膠色譜柱、制備液相等方法分離得單體化合物，利用UV、NMR、MS等波譜鑒定技術(shù)，確定單體化合物結(jié)構(gòu)。 結(jié)果： 第一部分 ①提取工藝條件：石菖蒲揮發(fā)油最佳提取條件為8倍量的水浸泡1

7、2小時(shí)，水蒸氣蒸餾提取6小時(shí)，用石油醚(60-90℃)萃取，石菖蒲揮發(fā)油可提取完全；全方最佳提取工藝為以8倍量50％乙醇回流提取2次，每次1.5小時(shí)。 ②最佳除雜條件：將“定志小丸”提取液濃縮到1g生藥/mL，加95％乙醇至含醇量為75％，進(jìn)行醇沉，醇沉上清液濃縮到0.4g生藥/mL，上D101大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行二次除雜，分別用水、30％和60％醇進(jìn)行梯度洗脫，收集水和60％醇洗脫液部分，減壓濃縮。 ③提取、除雜工藝質(zhì)量控制

8、方法：用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定的指標(biāo)成分總多糖和總皂苷能充分反映方中有效成分含量和產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，方法簡(jiǎn)單、可靠、可控。 ④藥效學(xué)試驗(yàn)表明，“定志小丸”提取物可以明顯減少小鼠跳臺(tái)試驗(yàn)的錯(cuò)誤次數(shù)，延長(zhǎng)潛伏期，生化指標(biāo)SOD、AChE、MDA測(cè)定結(jié)果表明具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 第二部分 從遠(yuǎn)志皂苷水解產(chǎn)物中分離得到了四個(gè)單體化合物，經(jīng)波譜分析鑒定，化合物的結(jié)構(gòu)分別為：化合物Ⅰ為遠(yuǎn)志酸，化合物Ⅱ?yàn)檫h(yuǎn)志皂苷元，化合物Ⅲ為遠(yuǎn)志