來氟米特活性代謝產(chǎn)物對類風濕性關節(jié)炎關節(jié)滑膜細胞產(chǎn)生IL-18的影響及其作用機制.pdf

1、目的：研究來氟米特活性代謝產(chǎn)物A771726對體外培養(yǎng)的人關節(jié)滑膜細胞產(chǎn)生白介素-18(IL-18)的影響及其產(chǎn)生藥學作用的機制，探討來氟米特在治療類風濕性關節(jié)炎(RA)中的作用。 方法：本研究采用RA關節(jié)置換術滑膜標本5例，所有病例診斷均符合美國風濕病學會(ACR)1987年修訂的類風濕性關節(jié)炎分類標準。同時收集正常關節(jié)滑膜標本3例作為正常對照。用膠原酶消化培養(yǎng)法培養(yǎng)原代細胞，本實驗采用3-8代Ⅱ型滑膜細胞(成纖維細胞樣滑膜細

2、胞)，選取光鏡下觀察生長狀態(tài)良好的Ⅱ型滑膜細胞。用MTT法檢測不同濃度A771726對體外培養(yǎng)的滑膜細胞細胞活力的影響，篩選藥物濃度。實驗共分9組，空白對照組、脂多糖(LPS)刺激分泌組、不同濃度A771726作用組3組、不同濃度A771726加尿嘧啶作用組3組、MTX藥物對照組。在48小時用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測培養(yǎng)上清中IL-18分泌變化情況。用免疫組化的方法檢測滑膜細胞內IL-18的含量。結果用SPSS12.0統(tǒng)計軟件

3、進行統(tǒng)計學分析。 結果：1.免疫組化染色顯示RAⅡ型滑膜細胞較NC滑膜細胞胞漿內IL-18表達增高；2.RA病人關節(jié)滑膜細胞培養(yǎng)上清中IL-18水平明顯高于正常人的IL-18水平；3.來氟米特活性代謝產(chǎn)物A771726對體外培養(yǎng)的人關節(jié)滑膜細胞分泌IL-18有抑制作用，并呈濃度依賴性；4.來氟米特抑制IL-18分泌的作用可在低濃度下(＜90μg/ml)被尿嘧啶阻止，而在高濃度下無此作用；5.在作用48小時、濃度不高于130μg/

4、ml，來氟米特對細胞活力沒有影響。 結論：IL-18在RA病人的滑膜細胞和滑膜細胞培養(yǎng)上清液中高表達，證明它參與了RA的病理過程；來氟米特活性代謝產(chǎn)物A771726抑制IL-18的產(chǎn)生，并呈濃度依賴性，證明該藥在RA的治療過程中可能有一定作用；低濃度來氟米特(＜90μg/ml)抑制IL-18分泌的作用可以被尿嘧啶完全阻止，證明在此濃度下來氟米特通過抑制嘧啶核苷酸從頭合成途徑產(chǎn)生藥學作用，高于此濃度可能通過抑制蛋白酪氨酸激酶活性或