魚腥草注射液的致敏性研究.pdf

1、魚腥草注射液為鮮魚腥草經(jīng)二次蒸餾后所制成的滅菌水溶液,主要含有揮發(fā)性成分,包括甲基正壬酮、癸酰乙醛、月桂醛等,其蒸餾液中含有約50多種成分。藥理研究證明魚腥草注射液有抗病原微生物,消炎、抗過敏、增強機體免疫功能、利尿、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳、抗活性氧、止血等作用,臨床上被廣泛用于治療呼吸道感染、泌尿系統(tǒng)感染、皮膚病、耳鼻喉科感染、婦科感染等疾病的治療。但隨著魚腥草注射液在臨床上的廣泛應用,其不良反應的報道也屢見不鮮。在對魚腥草注射液進行不良反應調查

2、中發(fā)現(xiàn),魚腥草注射液所致的不良反應可累及機體多個器官系統(tǒng),臨床表現(xiàn)亦復雜多樣,嚴重不良反應有呼吸困難,急性肺水腫,喉頭水腫,心跳呼吸驟停和死亡,直接死亡因為為過敏性休克。那么魚腥草注射液的致敏特點是什么,其致敏物質又是什么,導致超敏反應發(fā)生的機理是什么,有必要對此進行深入研究,以便尋找防治魚腥草注射液不良反應的途徑和方法,確實保障人民群眾的用藥安全。
　　 [目的]
　　 明確魚腥草注射液的超敏反應特點,確定魚腥草注射液

3、的過敏反應物質,并初步探討其過敏反應發(fā)生的機理。
　　 [方法]
　　 1.魚腥草注射液的“過敏反應”特點研究
　　 1.1豚鼠和BN大鼠的主動全身過敏試驗
　　 將豚鼠和BN大鼠均隨機分為以下各組:①陰性對照組(C)；②陽性對照組(P)；③魚腥草注射液組(YT)；④吐溫80組(T)；⑤魚腥草蒸餾液組(Y)。試驗分為致敏和激發(fā)二個階段。
　　 致敏:于試驗的第1、3、5天,各組分別腹腔注射相應受試

4、物:C組為生理鹽水；P組為0.6％血清白蛋白(BSA)；YT組為含0.5％吐溫的魚腥草注射液；T組為含0.5％吐溫的生理鹽水；Y組為魚腥草二次蒸餾液(用NaCl調節(jié)滲透壓)。注射體積均為1ml/只。
　　 1.2大鼠的被動皮膚過敏試驗
　　 致敏血清制備:將BN大鼠隨機分成以下各組:①正常對照組(C)；②佐劑對照組(A)；③陽性對照組(P)；④魚腥草注射液組(YT)；⑤吐溫80組(T)；⑥魚腥草蒸餾液組(Y)；每組6只動

5、物。將魚腥草注射液、0.5％吐溫80和魚腥草蒸餾液組分別與弗氏完全佐劑以1:1研勻,配制各組的致敏受試物。將上述混勻后的致敏受試物物分別于D1、D3、D5給BN大鼠腹腔注射,各1 ml。末次注射后21天,將動物用戊巴比妥鈉麻醉(30 mg/kg,ip),從腹腔動脈取血,3000轉/分離心15分鐘,分離血清,凍存于-80℃?zhèn)溆谩?br>　　 被動皮膚致敏:將SD大鼠隨機分成與BN大鼠各組對應的6組,每組5只。將上述各組的致敏血清用生理鹽

6、水稀釋成1:1、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32。將SD大鼠沿脊柱兩側預先脫毛3×4cm2,分別在脫毛區(qū)的左上、右上、左中、右中、左下、右下部位皮內注射1:1、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32的稀釋血清0.1mL以被動致敏。
　　 1.3 Beagle犬類過敏試驗
　　 將健康雄性Beagle犬隨機分為2組:對照組(C)和魚腥草注射液組(YT),每組5只。C組ⅳ生理鹽水,YT組ⅳ魚腥草注射液組,給藥體

7、積均為3.3mL/kg。2周后,再次注射給藥一次。首次注射和再次注射給藥后即刻至30 min內,觀察動物的“過敏反應”癥狀,并進行反應程度評分。于給藥后30min測定收縮壓(Systilic blood pressure,SBP),舒張壓(Diastolic blood pressure,DBP)；肉眼觀察呼吸頻率。
　　 2.魚腥草注射液的致敏物質研究
　　 2.1 Beagle犬類過敏試驗
　　 將健康雄性B

8、eagle犬隨機分為4組:C組、T組、Y組和YT組；每組4只。給藥前,先測定動物血壓、心率和呼吸。然后C組ⅳ生理鹽水:T組ⅳ0.5％吐溫80; YT組ⅳ魚腥草注射液組；Y組ⅳ魚腥草蒸餾液；各組給藥體積均為3 ml/kg,緩慢推注,2分鐘推完。給藥后即刻開始,記錄動物的過敏反應癥狀及其出現(xiàn)的時間以及反應程度,并于給藥后10min和30min,分別測定動物的血壓、心率和呼吸。首次給藥一個月后,再次采用上述同樣的給藥方法進行試驗。
　　

9、 2.2小鼠類過敏試驗
　　 將ICR小鼠隨機分為10組,每組10只動物:C組(ⅳ生理鹽水)；Compound48/80(ⅳ5 mg/g)；Y組(ⅳ魚腥草蒸餾液)；T1組(ⅳ0.5％吐溫80)；T2組(ⅳ2.5％吐溫80)；T3組(ⅳ5％吐溫80)；T4組(ⅳ10％吐溫80)；YT1組(ⅳ含0.5％吐溫80魚腥草注射液)；YT2組(ⅳ含2.5％q土溫80魚腥草注射液)；YT3組(ⅳ含5.0％吐溫80魚腥草注射液)；YT4組(ⅳ

10、含10％吐溫80魚腥草注射液)。以上所有組的受試物包括生理鹽水均用0.4％伊文思藍配制。各組小鼠分別靜脈給予20ml/kg。給藥后觀察1h內動物的行為學變化,耳廓藍染情況。小鼠于給藥后1h剪下雙耳,用3ml冷丙酮浸泡,用分光光度計檢測耳廓的伊文思藍滲出量。
　　 3.吐溫80的致類過敏機理初步研究
　　 3.1吐溫80對Beagle犬補體系統(tǒng)的作用
　　 在2.1試驗中,于給藥后10、30min取血,分離血漿,用

11、半數(shù)溶血試驗法和ELISA試劑盒測定血漿的總補體活性(CH50)；用ELISA試劑盒測定末端補體激活復合物(C5b-9)含量。
　　 3.2吐溫80對SD大鼠的血漿組胺和補體活性的影響
　　 將SD大鼠分為:C組、0.5％T組、2.0％T組、YT組、陽性藥compand48/800.625mg/kg組。給藥組動物均ⅳ給予相應的受試物,給藥量10 mL/kg,1min內給藥完畢。C組給予等體積生理鹽水。分別于注射后10、2

12、0、30 min,取血,分離血清。用ELISA試劑盒測定總補體活性、補體激活片段C5b-9、組胺及類胰蛋白酶含量的影響。
　　 3.3吐溫80對BN大鼠及豚鼠血清IgE含量的影響
　　 將BN大鼠、豚鼠分別隨機分為:C組,佐劑組,0.2％吐溫80組,4)佐劑+吐溫組。于試驗的第1、3、5天給動物腹腔注射0.2％吐溫1ml以致敏,于末次致敏后第7、14天,吐溫組靜脈注射含0.8％吐溫生理鹽水乳液1 ml/只進行激發(fā)刺激:而

13、對照組靜脈注射相同體積生理鹽水。每次激發(fā)后1 h內,從眼眶靜脈叢取血,分離血清,采用ELISA競爭試驗法檢測IgE含量。
　　 [結果]
　　 1.魚腥草注射液的“過敏反應”特點
　　 1.1魚腥草注射液不引起免疫介導的過敏反應
　　 豚鼠和BN大鼠全身過敏試驗結果顯示,T組、YT組和Y組無論是致敏(D1、3、5天腹腔注射)給藥,還是二次激發(fā)給藥后,所有動物均未見典型的過敏反應癥狀。而陽性藥BSA組激發(fā)后

14、出現(xiàn)典型的過敏反應,陽性率為100％,過敏反應程度為強陽性反應。結果提示,魚腥草注射液組、吐溫80以及魚腥草蒸餾液均不引起免疫介導的主動全身過敏反應
　　 大鼠的被動皮膚過敏試驗結果顯示,只有陽性對照組(BSA組)的被動皮膚過敏反應為陽性,陽性率為100％。其他實驗組包括T組、YT組和Y組均未能誘導被動皮膚過敏反應,結果均為陰性。結果提示,魚腥草注射液組、吐溫80以及魚腥草蒸餾液均不引起免疫介導的被動皮膚過敏反應。
　　

15、 以上二類試驗結果表明,魚腥草注射液的“過敏反應”可能不是由免疫介導的過敏反應。
　　 1.2魚腥草注射液可引起的類過敏反應
　　 Beagle犬首次給藥后,YT組的所有動物迅速(給藥后約2～5min)出現(xiàn)口唇、耳部紅腫、煩躁、甩頭,前肢撓頭、撓耳、蹭鼻、添舌,步態(tài)不穩(wěn),靜臥,排尿,排便,惡心等類似過敏反應的癥狀,反應陽性率為100％,反應程度達強陽性標準。同時,該組動物的血壓明顯下降,呼吸頻率增快。再次給藥后的癥狀與單

16、次給藥相似,反應未見增強。C組的所有動物均未出現(xiàn)異常反應,血壓正常。由于魚腥草注射液首次靜脈注射即可導致明顯的反應,因此,認為不是免疫介導的過敏反應,而是類過敏反應。
　　 2.魚腥草注射液的致敏物質是吐溫80
　　 小鼠靜脈注射加有0.4％伊文思藍為指示劑的0.5～10.0％吐溫80、含0.5～10.0％吐溫80魚腥草注射液后,均可見耳廓血管通透性增高,耳廓呈不同程度藍染,并呈現(xiàn)劑量依賴性。而魚腥草蒸餾液不引起小鼠耳廓

17、血管通透性增高。該結果也證明吐溫80是魚腥草注射液中的主要致類過敏物質。
　　 3.吐溫80的致類過敏機理初步研究
　　 吐溫80可導致Beagle犬血漿總補體活性(CH50)降低和補體激活片段復合物(C5b-9)含量增加,注射藥物后10 min較明顯。BALA/C小鼠靜脈注射2.0％吐溫后,血漿組胺含量明顯升高。結果提示,吐溫80致類過敏機理可能與補體激活和組胺釋放有一定關系。
　　 [結論]
　　 1

18、.魚腥草注射液導致的過敏反應可能是一種不需要抗體IgE介導的類過敏反應。
　　 2.魚腥草注射液的超敏反應與魚腥草二次蒸餾液關系不大；而其助溶劑0.5％吐溫80給藥后表現(xiàn)為明顯的超敏反應癥狀,表明吐溫80是魚腥草注射液中的主要致敏物質。
　　 3.吐溫80導致類過敏反應的發(fā)生是多條途徑共同作用的結果:①通過激活補體系統(tǒng),產生過敏毒素,誘發(fā)過敏反應的發(fā)生；②在不依賴IgE抗體的情況下,直接誘導肥大細胞脫顆粒,釋放組胺等活性