魚(yú)腥草注射液致大鼠和獼猴過(guò)敏性反應(yīng)的比較研究.pdf

1、魚(yú)腥草注射液臨床中主要應(yīng)用于熱淋熱痢、痰多咳嗽等疾病當(dāng)中，而隨著過(guò)敏反應(yīng)報(bào)道的增多，有許多學(xué)者對(duì)其致敏性進(jìn)行了研究，但多方法單一，且所使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人類(lèi)差異較大，因此需要采用多種方法及更為合適的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)魚(yú)腥草注射液的致敏性進(jìn)行再研究。
　　本實(shí)驗(yàn)中對(duì)魚(yú)腥草注射液對(duì)SD大鼠的致敏性反應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。且通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)建立獼猴細(xì)胞因子SYBR GreenⅡ?qū)崟r(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法，并利用此方法對(duì)魚(yú)腥草所引起的過(guò)敏反應(yīng)過(guò)程中相關(guān)細(xì)胞因子進(jìn)

2、行檢測(cè)。對(duì)魚(yú)腥草注射液對(duì)獼猴的致敏性反應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)，并且綜合以上實(shí)驗(yàn)對(duì)獼猴和大鼠兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在致敏性評(píng)價(jià)中的應(yīng)用進(jìn)行比較。
　　本實(shí)驗(yàn)中采用SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，利用主動(dòng)過(guò)敏實(shí)驗(yàn)對(duì)魚(yú)腥草注射液所引起的過(guò)敏性反應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)，并采用ELISA法對(duì)此過(guò)程中的IgE、IgG及組胺進(jìn)行檢測(cè)，利用熒光定量PCR法對(duì)IL-4、IL-10、IL-13和IFN-γmRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。設(shè)計(jì)引物，提取獼猴淋巴細(xì)胞中總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后建立以上

3、四種細(xì)胞因子實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法。以獼猴作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采用主動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)對(duì)魚(yú)腥草注射液所引起的過(guò)敏反應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)，并且采用ELISA法對(duì)此過(guò)程中過(guò)敏相關(guān)指標(biāo)組胺、IgE及IgG進(jìn)行檢測(cè)，以及利用熒光定量PCR法對(duì)過(guò)敏相關(guān)細(xì)胞因子IL-4、IL-10、IL-13和IFN-γmRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)SD大鼠主動(dòng)過(guò)敏實(shí)驗(yàn)中陽(yáng)性對(duì)照組呈強(qiáng)陽(yáng)性，陰性對(duì)照組呈陰性，魚(yú)腥草蒸餾液低劑量組及魚(yú)腥草蒸餾液高劑量組呈陰性，魚(yú)腥草注射

4、液A組及魚(yú)腥草注射液B組呈弱陽(yáng)性。ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，魚(yú)腥草蒸餾液低劑量組及魚(yú)腥草蒸餾液高劑量組組胺及IgE均略有升高，但并不顯著(P＞0.05)，魚(yú)腥草注射液A組及魚(yú)腥草注射液B組中SD大鼠體內(nèi)IgE含量有所升高但并不顯著(P＞0.05)。熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，魚(yú)腥草蒸餾液低劑量組及魚(yú)腥草蒸餾液高劑量組IL-4、IL-10、IL-13及IFN-γ均升高不顯著(P＞0.05)，而魚(yú)腥草注射液A組及魚(yú)腥草注射液B組中則顯著升高(P＜0

5、.01，P＜0.05)。本次實(shí)驗(yàn)中所建立的獼猴相關(guān)細(xì)胞因子熒光定量PCR檢測(cè)方法靈敏度高，所有因子均可達(dá)102copies/μL，重復(fù)性好，β-actin Ct值批內(nèi)變異系數(shù)＜0.02，批間變異系數(shù)介于0.018-0.060之間;IL-4Ct值批內(nèi)變異系數(shù)＜0.04，批間變異系數(shù)介于0.032-0.042之間;IL-10 Ct值批內(nèi)變異系數(shù)＜0.04，批間變異系數(shù)介于0.039-0.057之間;IL-13 Ct值批內(nèi)變異系數(shù)＜0.02，

6、批間變異系數(shù)介于0.017-0.026之間;IFN-γCt值批內(nèi)變異系數(shù)＜0.02，批間變異系數(shù)介于0.018-0.062之間。IL-4、IL-10、IL-13及IFN-γ熔解曲線顯示，產(chǎn)物為特異性單一峰。以獼猴作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)魚(yú)腥草注射液致敏性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，主動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)顯示，陽(yáng)性對(duì)照組呈強(qiáng)陽(yáng)性，陰性對(duì)照組呈陰性，魚(yú)腥草蒸餾液低劑量組及高劑量組均呈陰性，魚(yú)腥草注射液A組呈弱陽(yáng)性，魚(yú)腥草注射液B組呈陽(yáng)性。ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，魚(yú)腥草蒸餾液低

7、劑量組及高劑量組組胺及IgE均略有升高，但并不顯著(P＞0.05)，而對(duì)于魚(yú)腥草注射液A組及魚(yú)腥草注射液B組，組胺及IgE均顯著升高(P＜0.01)。在熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，魚(yú)腥草蒸餾液低劑量組及高劑量組IFN-γ、IL-4、IL-10及IL-13均顯著升高(P＜0.01)。魚(yú)腥草注射液A組及魚(yú)腥草注射液B組亦有所升高，但并不顯著(P＞0.05)。
　　本次實(shí)驗(yàn)證明在全身主動(dòng)過(guò)敏實(shí)驗(yàn)中，獼猴對(duì)魚(yú)腥草注射液的過(guò)敏反應(yīng)比SD大鼠更為激