先天性脊柱側(cè)凸的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、先天性脊柱側(cè)凸(Congenital scoliosis,CS)是指胚胎期脊椎發(fā)育異常而引起的脊柱側(cè)凸,可在冠狀面、矢狀面和水平面而引起脊柱三維畸形。胚胎發(fā)育過(guò)程中一種重要的過(guò)渡性組織-“體節(jié)(somite)”決定中軸骨的形成,己證明體節(jié)發(fā)育受影響可導(dǎo)致脊椎畸形,包括椎體形成障礙(半椎體、楔形椎和蝴蝶椎)和椎體分節(jié)不良。椎體畸形可因發(fā)育相關(guān)基因突變所致,也可能是妊娠中環(huán)境因素或這兩個(gè)因素共同作用所致,其確切病因還不清楚。
　　

2、目前關(guān)于CS的研究絕大多數(shù)都是針對(duì)該病的治療,涉及病因?qū)W方面的基礎(chǔ)研究很少。近年來(lái),隨著分子生物學(xué)和遺傳學(xué)的發(fā)展,已開(kāi)始了CS基因方面的初步研究,研究結(jié)果支持CS是一種多基因遺傳疾病。但是還沒(méi)有蛋白質(zhì)組學(xué)方面的報(bào)道。因此,在蛋白質(zhì)水平進(jìn)一步研究CS的病因,確立CS發(fā)病及進(jìn)展相關(guān)的分子標(biāo)志物,從而找到有效預(yù)測(cè)和防治CS加重的方法對(duì)于該病的臨床診治具有重大意義。2D-DIGE是近年來(lái)發(fā)展的新蛋白質(zhì)組技術(shù),是目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究中可信度和準(zhǔn)

3、確性最高的技術(shù)之一。對(duì)CS進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究,尋找患者血清的蛋白質(zhì)差異,有助于從分子水平認(rèn)識(shí)CS的發(fā)生發(fā)展機(jī)制,也可以為CS的診斷和防治提供有效的分子標(biāo)志物。
　　 目的:
　　 1.構(gòu)建CS患者與對(duì)照間血清差異蛋白質(zhì)組圖譜。
　　 2.應(yīng)用質(zhì)譜鑒定技術(shù),對(duì)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行鑒定。
　　 3.結(jié)合蛋白功能網(wǎng)絡(luò)研究成果,分析所鑒定的蛋白質(zhì)在CS發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　 研究方法:
　　 1

4、.采集15例胸椎畸形合并分節(jié)不良的先天性脊柱側(cè)凸患者和15例年齡、性別匹配的無(wú)脊柱畸形的對(duì)照組患者的血清。經(jīng)去高豐度蛋白、CyDye染料交叉標(biāo)記,然后進(jìn)行熒光雙向差異凝膠電泳、圖像掃描,并用DeCyder V.5.02圖像分析軟件對(duì)DIGE圖像進(jìn)行分析和尋找差異點(diǎn)。
　　 2.對(duì)篩選出的差異點(diǎn)進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF—MS)分析,檢索IPI—HUMAN數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定蛋白。
　　 研究結(jié)果:<

5、br>　　 1.經(jīng)過(guò)熒光雙向差異凝膠電泳、DeCyder軟件分析發(fā)現(xiàn),先天性性脊柱側(cè)凸患者和對(duì)照組血清中有155個(gè)蛋白質(zhì)差異點(diǎn),兩者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中62個(gè)點(diǎn)在CS血清中表達(dá)上調(diào),93個(gè)點(diǎn)表達(dá)下調(diào)。
　　 2.蛋白質(zhì)差異點(diǎn)經(jīng)質(zhì)譜分析,IPI—HUMAN數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定出16個(gè)差異蛋白。
　　 結(jié)論:
　　 1.首次對(duì)CS患者進(jìn)行蛋白質(zhì)組研究,成功構(gòu)建CS患者與無(wú)脊柱畸形的對(duì)照組患者血清差異蛋白質(zhì)組資料庫(kù)。<