HLa-DQ基因多態(tài)性與乙肝病毒突變在終末期肝病發(fā)生中的交互作用研究.pdf

1、研究背景:乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是我國乃至全球范圍內(nèi)的重大公共衛(wèi)生問題，全世界約有3.5億至4億的慢性HBV感染者。我國是全世界HBV感染人數(shù)最多的國家，感染人數(shù)約為9300萬。HBV慢性感染可能導(dǎo)致慢性肝損害、肝硬化（liver cirrhosis，LC）、肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)等嚴重肝臟疾病。目前，由于慢性HBV感染導(dǎo)致的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝癌

2、所引起的死亡人數(shù)約為100萬/年。雖然慢性乙肝病毒感染是影響人類生活質(zhì)量，危害人類健康的重要危險因素，各國家對HBV致病性研究也投入了大量人力財力，但其致病機制仍不明確，治療手段仍不理想。HBV核心啟動子區(qū)(EnhancerⅡ/BCP/PC region)及前S區(qū)(preS region)的核苷酸突變是慢乙肝患者進展為慢性肝損害、肝硬化、肝癌的可能原因之一，同時血清中病毒載量高、乙肝病毒C基因型及血清e抗原陽性等人體血清學(xué)特征也可能顯著

3、增加終末期肝病的患病風(fēng)險。我國乙肝病毒攜帶者多，可能說明我國居民的宿主遺傳因素與乙肝病毒感染風(fēng)險關(guān)系密切;我國乙肝患者分布地區(qū)有差異，可能說明環(huán)境因素在病毒感染過程中發(fā)揮重要作用。HLA-DQ屬于人類白細胞抗原(Human leukocyte cell，HLA)Ⅱ類分子，負責細胞外抗原遞呈，是參與機體免疫防御和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的重要分子。由于乙肝病毒慢性感染可激活感染者機體免疫系統(tǒng)，引起非可控性炎癥，而病毒本身又在機體免疫選擇的壓力下產(chǎn)生適

4、應(yīng)性進化，進一步加劇炎癥反應(yīng)甚至促進細胞惡變，因此研究HLA-DQ遺傳多態(tài)性、乙肝病毒突變及二者在乙肝病毒相關(guān)肝病中的相互作用，對明確乙肝病毒在體內(nèi)清除或慢性化的致病機制具有重大意義。
　　研究目的:分析HLA-DQ兩個位點rs2856718、rs9275319的單核苷酸多態(tài)性（Single nucleotide polymorphism，SNP）是否影響乙肝病毒清除、乙肝病毒慢性感染、乙肝后肝硬化及肝癌的發(fā)生;分析HLA-DQ

5、SNP基因型分布及性別分布是否與HBV突變頻率相關(guān)，以及HLA-DQ基因型及乙肝病毒突變的交互作用是否影響乙肝后肝硬化、肝癌的發(fā)生發(fā)展。
　　研究方法:本研究共納入1342例健康者、327例乙肝病毒自然清除者、611例無癥狀乙肝表面抗原攜帶者、1144例慢性乙型肝炎患者、734例乙肝后肝硬化患者以及1531例乙肝后肝癌患者。采用熒光探針-實時定量PCR法對HLA-DQ兩個位點進行單核苷酸多態(tài)性分型;采用巢式PCR法擴增HBV基因組

6、的EnhⅡ/BCP/PC和preS兩區(qū)并進行核苷酸測序;采用MEGA5.0將樣本HBV序列與野生型序列進行比對以獲得病毒突變;采用非條件logistic回歸分析法分析HLA-DQ單核苷酸多態(tài)性與HBV相關(guān)疾病的關(guān)系、HLA-DQ單核苷酸多態(tài)性與病毒突變頻率的關(guān)系，并分析HLA-DQ單核苷酸多態(tài)性與病毒突變的交互作用對乙肝相關(guān)終末期肝病的影響。
　　研究結(jié)果:
　　1、HLA-DQ基因多態(tài)性與乙肝病毒相關(guān)肝病的關(guān)系
　　

7、(1) HLA-DQ基因多態(tài)性與乙肝病毒慢性感染及乙肝病毒清除的關(guān)系
　　由于年齡和性別等因素影響分析結(jié)果，我們在校正年齡和性別因素的基礎(chǔ)上，得出rs2856718和rs9275319的AG基因型及顯性模型(AG+GG)均可顯著降低健康人感染慢性乙肝病毒的風(fēng)險(rs2856718AG: AOR=0.81，95％CI=0.69-0.95，P=0.009;AG+GG: AOR=0.83,95％CI=0.71-0.96, P=0.015

8、; rs9275319AG: AOR=0.69,95％CI=0.58-0.83,P=4.56×10-5; AG+GG: AOR=0.70,95％CI=0.59-0.84, P=5.87×10-5);當以乙肝病毒清除者作為對照時，未發(fā)現(xiàn)rs2856718與乙肝病毒慢性感染的關(guān)系，而rs9275319的AG基因型及顯性模型(AG+GG)能顯著增加乙肝病毒的清除，降低乙肝病毒的慢性感染(AG: AOR=0.63，95％CI=0.47-0.85

9、，P=0.003; AG+GG:AOR=0.65，95％CI=0.48-0.87，P=0.003)。將所有樣本進行基因型及性別分層后，無論是以健康人還是乙肝病毒清除者作對照，rs9275319的AG基因型及顯性模型（AG+GG）均可在男性人群及基因型C人群中顯著增加乙肝病毒清除，降低乙肝病毒慢性感染的風(fēng)險。
　　(2) HLA-DQ基因多態(tài)性和乙肝病毒相關(guān)終末期肝病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系
　　rs2856718的基因型GG及顯性模型

10、(AG+GG)可顯著增加乙肝病毒慢性感染者進展為肝硬化患者的風(fēng)險(GG: OR=1.52，95％CI=1.17-1.97，P=0.002; AG+GG:OR=1.27，95％CI=1.04-1.54，P=0.017)，該位點變異型顯性模型(AG+GG)可顯著降低健康者、乙肝病毒慢性感染者、肝硬化患者發(fā)生乙肝后肝癌的風(fēng)險。將HBV感染者進行基因型分層，分析結(jié)果顯示在基因型C感染者中，rs2856718 G等位基因與肝癌的關(guān)系較基因型B感染

11、者更為明顯;進行性別分層后，男性中的分析結(jié)果和在未進行分層的總體人群中結(jié)論一致，而在女性中二者則無相關(guān)性。rs9275319能降低非HBV感染人群的發(fā)病風(fēng)險(AG, AOR=0.68，95％CI=0.57-0.82，P=5.76×10-5; AG+GG,AOR=0.70，95％CI=0.58-0.84，P=9.49×10-5)，但與乙肝病毒相關(guān)肝硬化及肝癌的發(fā)生均無顯著關(guān)聯(lián)。
　　2、HLA-DQ基因多態(tài)性與乙肝病毒突變頻率的關(guān)系

12、
　　在基因型C感染者中，rs2856718的AG基因型及顯性模型(AG+GG)可顯著增加A1726C（肝硬化危險性、肝癌保護性突變）的突變頻率，rs9275319的GG基因型可顯著增加preS1啟動子突變的頻率。在基因型B感染者中，未發(fā)現(xiàn)HLA-DQ基因多態(tài)性和HBV突變頻率存在統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)。
　　3、HLA-DQ基因多態(tài)性與HBV突變的交互作用對乙肝后肝硬化及肝癌發(fā)生發(fā)展的影響
　　(1) HLA-DQ基因多態(tài)性和H

13、BV突變的交互作用對乙肝后肝硬化發(fā)生的影響
　　在基因型B感染者中，rs2856718的顯性模型(AG+GG)和G1652A（肝硬化危險性HBV突變）在乙肝后肝硬化的發(fā)展中存在顯著的協(xié)同性交互作用(AOR=6.28，95％CI=1.14-34.59，P=0.035)，二者的交互作用共同促進肝硬化的發(fā)生;在基因型C感染者中，rs2856718的顯性模型(AG+GG)和T1753V（肝硬化危險性HBV突變）存在顯著的拮抗性交互作用（A

14、OR=0.26，95％ CI=0.09-0.78，P=0.016），二者的共同作用降低了肝硬化的發(fā)生風(fēng)險。
　　(2) HLA-DQ基因多態(tài)性和HBV突變的交互作用在對乙肝后肝癌發(fā)生的影響
　　在基因型C感染者中，rs2856718的AG基因型與C1673T存在顯著的拮抗性交互作用，可增加肝癌的發(fā)生風(fēng)險(AOR=2.80，95％CI=1.02-7.66，P=0.045); rs2856718的顯性模型(AG+GG)和A184

15、6T（肝癌危險性HBV突變）在肝癌的發(fā)生過程中存在顯著的拮抗性交互作用，降低了肝癌的發(fā)生風(fēng)險(AOR=0.53，95％CI=0.29-0.98，P=0.042);在基因型B中，rs2856718的顯性基因型(AG+GG)與T1673C（HCC危險性HBV突變）存在協(xié)同性交互作用，可顯著降低肝癌的發(fā)生風(fēng)險(AOR=0.25，95％CI=0.07-0.93, P=0.039)。
　　結(jié)論:
　　1、rs2856718突變基因型（

16、AG與AG+GG基因型）可降低HBV慢性感染的風(fēng)險，同時還可增加乙肝后肝硬化發(fā)生風(fēng)險，降低乙肝后肝癌的發(fā)病風(fēng)險;rs9275319的突變基因（AG與AG+GG基因型）可顯著增加乙肝病毒的清除，降低乙肝病毒的慢性感染風(fēng)險。
　　2、HLA-DQ SNP和乙肝相關(guān)肝病的關(guān)系在HBV C基因型比B基因型明顯，在男性人群中較女性人群中明顯。
　　3、HLA-DQ SNP可影響HBV的核苷酸突變頻率，二者在乙肝后肝硬化及肝癌的發(fā)生中存