APOBEC-3A-B多態(tài)性與乙肝病毒變異在乙肝病毒相關(guān)肝細胞癌發(fā)生發(fā)展中的交互作用.pdf

1、背景:在我國，肝細胞癌(HCC)約占原發(fā)性肝癌的90％，HCC的發(fā)生發(fā)展是一個復(fù)雜的進化過程，是由機體本身的遺傳因素、外源的病毒因素及環(huán)境因素等多個因素相互作用綜合影響的過程。我國人口占世界人口的1/5、HBV慢性感染者占全球的1/3、而肝癌患者占全球的1/2以上，提示在中國流行的HBV很容易形成慢性感染，我國流行的HBV更加容易致癌。APOBECs家族具有脫氨基活性，可以將單鏈DNA(ssDNA)和RNA上的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶(C＞U

2、)。維持HBV慢性感染的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)—共價閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)也可在堿基切除修復(fù)通路(BER)的輔助下被A3誘導(dǎo)降解。因此，為了探索我國HCC發(fā)生的遺傳易感因素，研究APOBECs的遺傳多態(tài)性與HBV在HCC發(fā)生發(fā)展過程中的關(guān)系以明確HBV的致癌機制。
　　目的:研究APOBECs多態(tài)性(rs2267401，rs5750717，rs12628403)與HBV感染所致各階段肝病發(fā)生風(fēng)險的相關(guān)性，進而分析基因多態(tài)性與HBV突變的

3、關(guān)系以及二者在HCC發(fā)生發(fā)展過程中的交互作用，探索我國HCC發(fā)生的遺傳易感因素以及病毒因素，為預(yù)防HCC的發(fā)生以及預(yù)測HCC的發(fā)生提供流行病學(xué)依據(jù)。
　　方法:本實驗的研究對象共選取1012名健康對照、330名HBV自然清除者、316名無癥狀乙肝表面抗原攜帶者、866名慢性乙肝病毒感染者、482名肝硬化患者和1165名肝癌患者，采用熒光定量PCR技術(shù)對這些樣本的APOBECs的3個單核苷酸多態(tài)性位點進行檢測分型。在網(wǎng)站上（http

4、://www.oege.org./software/hwe-mr-calc.shtml）對以上3個SNP位點進行HWE P value檢驗。采用兩獨立樣本t檢驗或方差分析進行比較，x2檢驗，logistic回歸模型也被用于分析APOBECs多態(tài)性與乙肝病毒感染或肝細胞癌的關(guān)系，以及與乙肝病毒變異在肝細胞癌發(fā)生發(fā)展中的交互作用。
　　結(jié)果:
　　1.APOBECs多態(tài)性與乙肝病毒感染及其與HCC發(fā)生的關(guān)系
　　(1)以健

5、康對照為參照，rs2267401 TG基因型能顯著降低HBV相關(guān)HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=0.74，95％CI=0.57-0.96)，而GG基因型及G等位基因均能顯著升高HBV相關(guān)HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=1.40，95％CI=1.08-1.83;AOR=1.18，95％CI=1.01-1.39)。以HBV感染的非HCC組(non-HCC)作為參照，rs5750717的G等位基因能顯著降低HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=0.80，95％CI=

6、0.65-0.98)。以肝炎后肝硬化組作為參照，rs2267401的TG、GG及G等位基因均能顯著增加HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=1.50,95％CI=1.04-2.16; AOR=1.75,95％CI=1.26-2.42;AOR=1.60，95％CI=1.31-1.95)。以乙肝表面抗原自然清除者(HBsAgclearances)作為參照，rs2267401的TG基因型能顯著降低HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=0.35，95％CI=0.19-

7、0.64); rs5750717的AG、GG及G等位基因均能顯著降低HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=0.18，95％CI=0.09-0.33; AOR=0.21，95％CI=0.10-0.45;AOR=0.23，95％CI=0.15-0.34); rs12628403的CC基因型及C等位基因均能顯著降低HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=0.16，95％CI=0.09-0.29; AOR=0.36，95％CI=0.26-0.50)。
　　(2)按

8、照性別分層:在男性中，與健康對照組比較，rs2267401TG基因型顯著降低HBV相關(guān)HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=0.63，95％CI=0.47-0.85)。與肝炎后肝硬化組相比，rs2267401的GG基因型及G等位基因能顯著增加HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=1.93，95％CI=1.31-2.86; AOR=1.71，95％CI=1.35-2.17)。以乙肝表面抗原自然清除者為參照，rs2267401的TG基因型能顯著降低HCC的發(fā)病風(fēng)險

9、(AOR=0.32，95％CI=0.17-0.63);rs5750717的AG、GG基因型及G等位基因均能顯著降低HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=0.19，95％CI=0.10-0.38; AOR=0.21，95％CI=0.09-0.49; AOR=0.23，95％CI=0.15-0.36); rs12628403的CC基因型及C等位基因能顯著降低HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=0.17,95％CI=0.09-0.34; AOR=0.37,95％C

10、I=0.26-0.53)。
　　在女性中，以健康對照比較， rs2267401的G等位基因能顯著增加HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=1.45，95％CI=1.04-2.04)。與HBV感染的非HCC組相比，rs2267401的TG基因型及G等位基因均能顯著增加HBV感染后HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=1.72，95％CI=1.06-2.80;AOR=1.33，95％CI=1.01-1.74)。以乙肝表面抗原自然清除者為參照， rs57507

11、17的AG基因型及G等位基因均能顯著降低HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=0.10,95％CI=0.01-0.65; AOR=0.20,95％CI=0.07-0.55); rs12628403的CC基因型及C等位基因能顯著降低HCC的發(fā)病風(fēng)險(AOR=0.14，95％CI=0.03-0.65;AOR=0.34,95％CI=0.17-0.69)。
　　(3)以HBV基因型分層:利用性別和年齡校正后，rs5750717 GG基因型顯著降低基因

12、型B HBV感染的非HCC患者發(fā)展成HCC的風(fēng)險(AOR=0.10，95％CI=0.01-0.77)。利用性別和年齡校正后，rs5750717AG基因型能夠顯著降低基因型C病毒感染的非HCC患者發(fā)展成HCC的風(fēng)險(AOR=0.45，95％CI=0.28-0.72)。
　　2.APOBECs多態(tài)性與乙肝病毒突變之間的關(guān)系
　　(1)在基因型C的感染者中，rs2267401 TG基因型能顯著增加C1653T的突變頻率。在基因型B

13、的感染者中，rs2267401 GG突變基因型能顯著增加G2946A的突變頻率，同時rs2267401 TG基因型及G等位基因型能顯著降低A1846T與G1896A的突變頻率。
　　(2)對rs5750717各基因型進行分析之后發(fā)現(xiàn)，在基因型C的感染者中，rs5750717 AG基因型能顯著降低G1764A和G1896A的突變頻率，并能顯著降低C1799G的突變頻率。rs5750717 GG基因型和G等位基因型能顯著增加T1674

14、G，A1727T和C2875A的突變頻率，同時降低A1762T/G1764A和C1913A的突變頻率。
　　(3)對rs12628403各基因型進行分析之后發(fā)現(xiàn)，在基因型C的感染者中，rs12628403的各突變基因型能顯著增加G1899A，C1913A，C2964A，A3120G的突變頻率。在基因型B的感染者中，rs12628403的各突變基因型能顯著增加preSdeletion，A1846T，G1896A，C2875A，C29

15、31T的突變頻率。
　　3.APOBECs多態(tài)性與乙肝病毒突變在LC及HCC的發(fā)生發(fā)展過程中的交互作用
　　(1) rs2267401與病毒突變在LC及HCC中的交互作用:
　　在B亞型中，rs2267401的顯性模型(TG+GG)和G1896A在非肝硬化HBV感染者進展為LC的過程中存在顯著的協(xié)同性交互作用。
　　在C亞型中，rs2267401的TG基因型和preS deletion在C型感染者進展為HCC的過

16、程中存在顯著的協(xié)同性交互作用。此外，rs2267401的顯性模型(TG+GG)與preS1start codon mutation在HBV感染者進展為HCC的過程中也存在顯著的協(xié)同性交互作用。rs2267401的TG基因型和T1674CG在非肝硬化HBV感染者進展為LC的過程中存在顯著的協(xié)同性交互作用。
　　(2) rs5750717與病毒突變在LC及HCC中的交互作用:
　　在B亞型中，rs5750717的顯性模型(AG+

17、GG)和G1719T及T1727G在HBV感染者進展為HCC的過程中均存在顯著的協(xié)同性交互作用。rs5750717的顯性模型(AG+GG)和G1896A在非肝硬化HBV感染者進展為LC的過程中存在顯著的協(xié)同性交互作用。而rs5750717的顯性模型(AG+GG)和T3054A在非肝硬化HBV感染者進展為LC的過程中存在顯著的拮抗性交互作用。
　　在C亞型中，rs5750717的顯性模型(AG+GG)和C1673T在HBV感染者進展

18、為HCC的過程中存在顯著的拮抗性交互作用。rs5750717的顯性模型(AG+GG)和T1674CG及G1719T在HBV感染者進展為HCC的過程中均存在顯著的協(xié)同性交互作用。rs5750717的AG基因型和preS2 start codon mutation在HBV感染者進展為HCC的過程中存在顯著的協(xié)同性交互作用。rs5750717的AG基因型和C1653T在非肝硬化HBV感染者進展為LC的過程中存在顯著的協(xié)同性交互作用。rs575

19、0717的顯性模型(AG+GG)和A1726C及A1727T在非肝硬化HBV感染者進展為LC的過程中均存在顯著的拮抗性交互作用。
　　(3) rs12628403與病毒突變在LC及HCC中的交互作用:
　　在B亞型中，rs12628403的顯性模型(AC+CC)和G1652A及T1673C在HBV感染者進展為HCC的過程中均存在顯著的拮抗性交互作用。此外，rs12628403的AC基因型和G1899A在HBV感染者進展為HC

20、C的過程中存在顯著的協(xié)同性交互作用。rs12628403的顯性模型(AC+CC)和T53C在HBV感染者進展為HCC的過程中也存在顯著的協(xié)同性交互作用。
　　在C亞型中，rs12628403的顯性模型(AC+CC)和G1896A及T53C在HBV感染者進展為HCC的過程中均存在顯著的協(xié)同性交互作用。rs12628403的AC基因型和C1653T在非肝硬化HBV感染者進展為LC的過程中存在顯著的拮抗性交互作用。rs12628403的

21、顯性模型(AC+CC)和C1766T在非肝硬化HBV感染者進展為LC的過程中存在顯著的協(xié)同性交互作用。rs12628403的顯性模型(AC+CC)和T2857C在非肝硬化HBV感染者進展為LC的過程中存在顯著的拮抗性交互作用。
　　結(jié)論:
　　1.rs2267401 TG基因型能顯著降低健康人群中HBV相關(guān)HCC的發(fā)病風(fēng)險，而GG基因型及G等位基因均能顯著升高健康人群中HBV相關(guān)HCC的發(fā)病風(fēng)險;rs5750717的G等位基

22、因能顯著降低非肝癌HBV感染患者發(fā)生HCC的風(fēng)險;rs2267401的TG、GG及G等位基因均能顯著增加肝硬化患者發(fā)生HCC的風(fēng)險;rs2267401的TG基因型、rs5750717的AG、GG及G等位基因、rs12628403的CC基因型及C等位基因均能顯著降低乙肝表面抗原自然清楚者發(fā)生HCC的風(fēng)險。
　　2.在基因型B的感染者中，rs5750717 GG基因型能夠顯著降低HCC的發(fā)生風(fēng)險。在基因型C的感染者中，rs575071