加味三棱丸主要成分抑制子宮內(nèi)膜異位癥效果觀察及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察加味三棱丸主要成分(簡稱SLW)對子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠移植物體積和血清中雌二醇(E2)、孕激素(P)值的影響，篩選加味三棱丸主要成分組方的最佳配比；觀察加味三棱丸主要成分對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥血管生成、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)以及腫瘤壞死因子(TNF-ot)表達(dá)的影響，探討加味三棱丸主要成分治療子宮內(nèi)膜異位癥的療效及抗內(nèi)膜異位血管生成的機(jī)制。 方法 L自體移植法，即開腹將自體子宮內(nèi)膜縫于腹壁，建立大鼠子宮內(nèi)

2、膜異位癥(EMS)模型。采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法，以移植物體積和血清中E2值、P值為考察指標(biāo)，對加味三棱丸3種主要成分A、B、C每種成分的三個不同濃度進(jìn)行優(yōu)化。確定加味三棱丸主要成分中藥物的最佳配比，并將最佳配比組與模型組進(jìn)行比較，驗(yàn)證其藥效。以最佳配比進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。 2．建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型，根據(jù)最佳配比，給予加味三棱丸主要成分高、中、低三個濃度灌胃，每天1次連續(xù)28天，等容積灌胃0．5mg．kg-1孕三烯酮作為陽性對照。檢測

3、移植物體積，血清中E2、P含量，光鏡下觀察組織形態(tài)，免疫組化觀察異位子宮內(nèi)膜微血管密度(MVD)、血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)和腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactor-alpha，rSF-0t)的表達(dá)，RT-PCR方法檢測血管內(nèi)皮生長因子mRNA和腫瘤壞死因子αmRNA的表達(dá)。 結(jié)果 LSLW藥物最佳配比篩選結(jié)果經(jīng)過正交試驗(yàn)多因素方差分析，綜

4、合三個藥效學(xué)指標(biāo)，選擇A283C1為最佳配比，即成分A1g．kg一、成份B2g．kg～、成份C0．04g．kg～。SLW最佳配比治療組大鼠異位組織體積減小158．7+41．7mm3，模型組體積增大30．7+43．8mm3，兩者相比差異顯著(P<0．05)；最佳配比治療組E2值為18．35+9．42pg／ml，與模型組E2值65．45士4．15pg／ml相比顯著性降低(P<0．05)；最佳配比組P值為15．70+1．OOng／ml，與模型

5、組P值10．51+1．90ng／ml相比沒有顯著性差異(P>0．05)。 2．SLW對EMS大鼠移植物體積及形態(tài)學(xué)改變的影響用藥4周后，SLW高、中、低治療組移植物體積大多明顯縮小，模型組比4周前略有增加，呈隆起透亮的小泡狀，內(nèi)有積液，表面血管清晰可見。SLW高、中劑量組移植物體積分別為7．6+3．6mm3、20．5+11．9mm3，與模型組63．4+37．2mm3相比有顯著性差異(P<0．05)，SLW低劑量組的移植物體積為3

6、2．9-~：29．6mm3，與模型組相比差異沒有顯著性(P>0．05)。光鏡下觀察模型組、各劑量組及孕三烯酮組移植的子宮內(nèi)膜組織均成活，形成的囊壁由內(nèi)向外分別為上皮細(xì)胞層、間質(zhì)細(xì)胞層及少量纖維結(jié)締組織。模型對照組異位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞呈高柱狀，內(nèi)膜間質(zhì)豐富，呈淡紅色。SLW高劑量組、中劑量和孕三烯酮陽性對照組，內(nèi)膜腺上皮層明顯變薄，細(xì)胞呈矮柱狀甚至扁平狀，松散排列，核不規(guī)則，位置不定，胞漿嗜堿性增加。 3．SLW對EMS大鼠E2值、

7、P值的影響SLW低、中、高劑量組E2值分別為45．47~33lpg／mi、31．40+6．66pg／ml、17．67~1．54pg／ml，與模型組E2值78．93~9．53pg／ml相比均顯著降低(P<0．05)。SLW低、中、高劑量組P值分別為9．83~2．27ng／ml、10J5~2．53ng／ml、7．75~1．05ng／ml，與模型P值5．64~1．42ng／ml相比，差異均沒有顯著性意義(P>0．05)。 4．SLW對

8、EMS大鼠異位組織MVD、VEGF及TNF-a蛋白表達(dá)的影響VIII因子陽性細(xì)胞染色為棕黃色，陽性染色細(xì)胞主要是血管內(nèi)皮細(xì)胞。染色結(jié)果顯示模型組異位組織血管豐富，血管數(shù)目多且密集。SLW高、中劑量組血管數(shù)量較少，MVD值分別為22．99~3．44、25．00~3．95，與模型組31．01士5．12相比有顯著性差異(P<0．05)。VEGF陽性細(xì)胞胞漿染色為棕黃色，陽性染色細(xì)胞主要是異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞胞漿。模型組異位組織VEGF陽性染色細(xì)胞

9、數(shù)量多而密集，染色呈黃色或棕黃色，SLW高、中劑量組陽性細(xì)胞數(shù)量少，陽性染色細(xì)胞百分率(％)分別為43．09~7．61、45．95士6．15，與模型組55．83~5．33相比有顯著性差異(P<0．05)。SLW高、中劑量組相對光密度值分別為146．68~4．17、145．53~5．01，與模型組139．24~3．27有顯著性差異(均P<0．05)。TNF-~陽性細(xì)胞胞漿染色為棕黃色，陽性染色細(xì)胞主要是異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞胞漿。模型組異位組織

10、TNF-{1陽性染色細(xì)胞數(shù)量多而密集；SLW高劑量組陽性細(xì)胞數(shù)量少，陽性染色細(xì)胞百分率(％)為35．834-5．34，與模型組48．33~4．93相比有顯著性差異(P

11、與模型組相比差異有顯著性意義(p<0．05)。 5．SLW對EMS大鼠異位組織VEGFmRNA和TNF-amRNA的影響RT-PCR結(jié)果顯示，經(jīng)SLW治療后，EMS大鼠異位內(nèi)膜組織VEGFmRNA的表達(dá)顯著減少，SLW低、中、高劑量組條帶相對光密度值分別為1．44-4-0．11、1．334-0．16、1．084-0．05，與模型組條帶相對光密度值2．40~0．10L匕較均有顯著性差異(均P<0．05)；經(jīng)SLW處理后，異位內(nèi)膜組

12、織TNF-amRNA的表達(dá)較模型組有不同程度的減少，SLW低、中、高劑量組條帶相對光密度值分別為1．74~0．24、1．32~0．22、1．22~0．08，與模型組條帶相對光密度值2．18~0．27L匕較差異顯著(P<0．05)。 結(jié)論 1．最佳配比濃度的SLW可抑制大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)展，縮小異位內(nèi)膜體積，改善異位內(nèi)膜病理學(xué)顯微結(jié)構(gòu)，降低血清雌二醇含量。 2．SLW抑制大鼠子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)展的機(jī)制，與抑制異位