放療對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響.pdf

1、背景:瘢痕疙瘩是一種病理性瘢痕，在臨床上非常多見(jiàn)，具有發(fā)紅、瘙癢、刺痛和燒灼感等顯著的臨床表現(xiàn)，給患者帶來(lái)很大的生理和心理負(fù)擔(dān)。瘢痕疙瘩的發(fā)病機(jī)制并不明確，最新研究發(fā)現(xiàn)瘢痕疙瘩的發(fā)生可能與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)，瘢痕疙瘩中的成纖維細(xì)胞可能是角質(zhì)形成細(xì)胞經(jīng)EMT轉(zhuǎn)化而來(lái)。瘢痕疙瘩的治療方法眾多，但無(wú)論是手術(shù)還是單一無(wú)創(chuàng)治療的復(fù)發(fā)率均較高。手術(shù)切除聯(lián)合術(shù)后放療的方法是治療瘢痕疙瘩最有效的方法。目前尚無(wú)研究從EMT角度出發(fā)探索術(shù)后放療抑制

2、瘢痕疙瘩復(fù)發(fā)的作用機(jī)制。
　　目的:探索放療對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響。
　　方法:對(duì)人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT細(xì)胞給予10ng/ml TGF-β1處理，以未經(jīng)處理的角質(zhì)形成細(xì)胞作為陰性對(duì)照，以從手術(shù)標(biāo)本原代培養(yǎng)得到的成纖維細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照，觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，測(cè)定處理后1天、3天與7天上皮化與間質(zhì)化標(biāo)志物的表達(dá)，確認(rèn)是否成功構(gòu)建EMT模型。對(duì)一組HaCaT細(xì)胞進(jìn)行9Gy放療，對(duì)另一組HaCaT細(xì)胞同時(shí)給予9Gy

3、放療與10ng/ml TGF-β1處理。觀察陰性對(duì)照組、放療組與放療聯(lián)合TGF-β組細(xì)胞的形態(tài)變化，進(jìn)行劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力，測(cè)定處理后1天、3天與7天上皮化與間質(zhì)化標(biāo)志物的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.對(duì)HaCaT細(xì)胞進(jìn)行10ng/ml TGF-β1處理后，觀察到細(xì)胞形態(tài)從典型的角質(zhì)形成細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)轭愃瞥衫w維細(xì)胞的形態(tài);而放療后細(xì)胞形態(tài)未發(fā)生明顯的變化，同時(shí)細(xì)胞死亡速率加快。
　　2.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示未經(jīng)處理的

4、HaCaT細(xì)胞遷移能力最弱，在TGF-β1誘導(dǎo)下發(fā)生了EMT的細(xì)胞遷移能力最強(qiáng)，對(duì)HaCaT細(xì)胞行放療之后，細(xì)胞的遷移能力略有增強(qiáng)，對(duì)HaCaT行放療與TGF-β1雙重處理之后，細(xì)胞的總體遷移能力與單純行TGF-β1處理相似，略弱于后者。
　　3.經(jīng)過(guò)TGF-β1處理后1天、3天和7天細(xì)胞的上皮化標(biāo)志物ZO-1與CDH1的基因表達(dá)和蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P＜0.05)，間質(zhì)化標(biāo)志物CDH2的基因表達(dá)與蛋白表達(dá)上調(diào)，F(xiàn)N1的基因表達(dá)顯著

5、上調(diào)(P＜0.05)，Vimentin的蛋白表達(dá)上調(diào)。
　　4.放療后培養(yǎng)1天與3天的細(xì)胞中上皮化標(biāo)志物的基因表達(dá)和蛋白表達(dá)均上調(diào)，間質(zhì)化標(biāo)志物的基因表達(dá)和蛋白表達(dá)下調(diào)。5.放療聯(lián)合TGF-β1組細(xì)胞除了E-Cadherin蛋白表達(dá)之外，其余上皮化標(biāo)志物的基因表達(dá)和蛋白表達(dá)均高于TGF-β1組;間質(zhì)化標(biāo)志物除了CDH2的基因表達(dá)與TGF-β1組相似，其余標(biāo)志物的基因表達(dá)和蛋白表達(dá)低于TGF-β1組。
　　結(jié)論:TGF-β1成