深低溫停循環(huán)對(duì)大鼠腦皮層細(xì)胞凋亡影響的研究.pdf

1、目的:深低溫停循環(huán)和深低溫低流量方法在心臟外科得到廣泛應(yīng)用,但其暫時(shí)或永久的神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥卻高達(dá)4％-25%(平均8%),而且安全時(shí)限在45-60分鐘,限制了該方法的臨床應(yīng)用.近年來(lái)大量研究顯示這些遲發(fā)性的神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥與腦缺血誘發(fā)腦細(xì)胞的凋亡有關(guān).該研究采用大鼠深低溫頸總動(dòng)脈阻斷模型,應(yīng)用流式細(xì)胞儀、電鏡、原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)、免疫組化法(SABC)和RT-PCR技術(shù)分別檢測(cè)深低溫腦缺血對(duì)皮層神經(jīng)細(xì)胞調(diào)亡的影響方法:第一部

2、分深低溫停循環(huán)腦保護(hù)大鼠模型的建立:SD大鼠20只,麻醉后氣管插管輔助呼吸,用冰塊將大鼠的體溫降至(21±1)℃,阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈,記錄體溫、心率、血壓、血氧飽和度和血?dú)夥治?60分鐘后恢復(fù)頸總動(dòng)脈血流,用Longa等的5級(jí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定4小時(shí)和24小時(shí)后大鼠神經(jīng)系統(tǒng)損傷情況.第二部分深低溫停循環(huán)對(duì)大鼠腦細(xì)胞凋亡影響的研究:SD大鼠30只,隨機(jī)分為3組:深低溫對(duì)照(DHC)組、常溫對(duì)照(NTC)組和深低溫停循環(huán)(DHCA)組,采用大鼠深低

3、溫雙側(cè)頸總動(dòng)脈阻斷后再灌注模型(深低溫停循環(huán)腦保護(hù)大鼠模型),在21℃時(shí)將雙側(cè)頸總動(dòng)脈阻斷60min再灌注24h后.(1)取大腦皮層細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡改變,電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化;(2)用原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)凋亡細(xì)胞百分率;(3)免疫組化法檢測(cè)Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表達(dá).第三部分深低溫停循環(huán)對(duì)大鼠腦細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響:用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)Bcl-2、Bax和Casp