高壓氧與亞低溫對(duì)大鼠腦挫傷細(xì)胞凋亡及Bcl-2表達(dá)的影響.pdf

1、目的: 創(chuàng)傷性腦損傷（traumatic brain injury，TBI）病灶的發(fā)生和進(jìn)展與腦挫傷周圍組織發(fā)生的延遲神經(jīng)元死亡有密切關(guān)系。近年的研究證實(shí)，細(xì)胞凋亡（apoptosis）在TBI的延遲性細(xì)胞死亡中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)參照Feeney等的自由落體硬膜外撞擊法，經(jīng)改良后制作大鼠腦挫傷動(dòng)物模型，應(yīng)用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（Terminal deoxynucleotidyl Transferase B

2、iotin-dUTP Nick End Labeling，TUNEL）以及免疫組織化學(xué)方法（SABC法），檢測(cè)高壓氧（HBO）和亞低溫（MHT）治療對(duì)損傷腦組織中的細(xì)胞凋亡狀態(tài)及Bcl-2蛋白表達(dá)水平，從分子生物學(xué)水平探討細(xì)胞凋亡與腦損傷組織中延遲性細(xì)胞死亡的關(guān)系，探討高壓氧及亞低溫治療對(duì)TBI的腦保護(hù)作用，為臨床顱腦外傷的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料與方法: 實(shí)驗(yàn)采用40只成年wistar大鼠，參照Feeney等的自由落體

3、硬膜外撞擊法，經(jīng)改良后制作大鼠腦挫傷動(dòng)物模型，隨機(jī)分為四組：TBI組、TBI+HBO組、TBI+MHT組和TBI+HBO+MHT組。應(yīng)用原位末端標(biāo)記法（TUNEL）和流式細(xì)胞術(shù)對(duì)各組動(dòng)物腦挫傷灶旁的細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行檢測(cè)；使用免疫組化方法檢測(cè)Bcl-2蛋白在腦組織中的表達(dá)水平。 結(jié)果: HE常規(guī)染色切片中可見(jiàn)挫傷壞死灶，灶內(nèi)有大量細(xì)胞核碎片聚集，灶周內(nèi)大量有核細(xì)胞密集，核大小較均一，其間雜有染色質(zhì)濃縮邊集及突出細(xì)胞的凋亡

4、小體。TUNEL陽(yáng)性染色細(xì)胞主要表現(xiàn)為細(xì)胞核呈黃綠色熒光，在各組切片中，陽(yáng)性細(xì)胞均主要分布于灶周4mm范圍內(nèi)，余部及對(duì)側(cè)腦組織幾乎無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞發(fā)現(xiàn)。流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率顯示，經(jīng)高壓氧與亞低溫治療后，細(xì)胞凋亡率明顯降低，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Bcl-2陽(yáng)性染色細(xì)胞主要表現(xiàn)為細(xì)胞核呈棕黃色，TBI+HBO組、TBI+MHT組和TBI+HBO+MHT組Bcl-2的表達(dá)均高于TBI組（P<0．05），其中TBI+HBO+MHT組Bcl-2表

5、達(dá)最高，這些數(shù)據(jù)與經(jīng)高壓氧及亞低溫治療后細(xì)胞凋亡數(shù)的減少相一致。 結(jié)論; 1、細(xì)胞凋亡機(jī)制在TBI延遲細(xì)胞死亡中起重要作用，細(xì)胞凋亡參與TBI的病理過(guò)程，增加細(xì)胞死亡數(shù)量及范圍。 2、高壓氧和亞低溫治療能明顯減少腦挫傷組織的細(xì)胞凋亡數(shù)量及范圍，并能通過(guò)增加Bcl-2蛋囪表達(dá)水平抑制正常細(xì)胞凋亡，減少延遲性神經(jīng)細(xì)胞死亡。 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明高壓氧和亞低溫治療對(duì)創(chuàng)傷性腧組織均有神經(jīng)保護(hù)作用，二者聯(lián)合應(yīng)用效果更明