胎盤免疫調(diào)節(jié)因子的分離純化及其對PC12細胞生長的影響.pdf

1、第一部分胎盤免疫調(diào)節(jié)因子的分離純化及活性檢測 目的:純化胎盤免疫調(diào)節(jié)因子(placentafactorPF)和篩選活性最顯著的組分。 方法:將新鮮人胎盤去筋膜，生理鹽水沖凈、剪碎勻漿，反復凍融后，透析，取透析外液凍干，上樣于SephadexG-25凝膠層析柱，洗脫，收集各組份。通過培養(yǎng)淋巴細胞，用MTT法鑒定PF純化產(chǎn)物的活性，反相高效液相色譜分析純產(chǎn)物的純度，基質(zhì)輔助激光解吸附電離串行飛行時間質(zhì)譜測定產(chǎn)物的分子量。

2、 結(jié)果:PF經(jīng)SephadexG-25凝膠柱純化后，得到的第四峰具有明顯促進淋巴細胞增殖活性，是胎盤免疫調(diào)節(jié)因子的主要活性成分，是分子量為6737.813Da的多肽，其純度為82％，結(jié)論胎盤免疫調(diào)節(jié)因子經(jīng)SephadexG-25凝膠柱純化得到的第四峰是胎盤免疫調(diào)節(jié)因子的主要活性成分，其純度為82％，分子量為6737.813Da。 第二部分胎盤免疫調(diào)節(jié)因子對PC12細胞生長的影響 目的：觀察胎盤免疫調(diào)節(jié)因子(place

3、ntafactorPF)對PC12細胞生長的影響。 方法：培養(yǎng)PC12細胞，用MTT法觀察PF對體外無血清培養(yǎng)PC12細胞存活率的影響及PF對低血清培養(yǎng)PC12細胞增殖的影響，普通光學顯微鏡觀察PC12細胞形態(tài)的變化。 結(jié)果：對無血清培養(yǎng)的PC12細胞加入不同濃度的PF培養(yǎng)44小時后，PF在濃度為50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml和6.25μg/ml時可以顯著提高無血清培養(yǎng)PC12細胞的存活率(P<0.0

4、5)。對低血清培養(yǎng)的PC12細胞加入不同濃度的PF培養(yǎng)68小時后，PF在濃度為12.5μg/ml和6.25μg/ml時可以顯著提高PC12細胞的數(shù)量(P<0.01)。對低血清培養(yǎng)的PC12細胞加入不同濃度的PF培養(yǎng)10天，PF在濃度為3.13μg/ml和1.56μg/ml作用第6天時，細胞長出突起。 結(jié)論：PF能提高無血清培養(yǎng)PC12細胞的存活率，促進PC12細胞增殖，誘導PC12細胞分化。 第三部分PF純化第四峰(PFI

5、V)對PC12細胞生長的影響 目的：觀察胎盤免疫調(diào)節(jié)因子純化第四峰(PFIV)對PC12細胞生長的影響。 方法：培養(yǎng)PC12細胞，用MTT法觀察PFIV對體外無血清培養(yǎng)PC12細胞存活率的影響及PFIV對低血清培養(yǎng)PC12細胞增殖的影響，普通光學顯微鏡觀察PC12細胞形態(tài)的變化。 結(jié)果：對無血清培養(yǎng)的PC12細胞加入不同濃度的PFIV培養(yǎng)44小時后，在濃度為15μg/ml、7.5μg/ml、3.75μg/ml和1.

6、88μg/ml時可以顯著提高無血清培養(yǎng)的PC12細胞的存活率(P<0.05)。對低血清培養(yǎng)的PC12細胞加入不同濃度的PFIV培養(yǎng)68小時后，在濃度為0.47μg/ml和0.235μg/ml時可以顯著提高PC12細胞的數(shù)量(P<0.01)。對低血清培養(yǎng)的PC12細胞加入不同濃度的PFIV培養(yǎng)10天，PFIV在濃度為0.118μg/ml和0.059μg/ml作用第6天時，細胞長出突起。 結(jié)論：胎盤免疫調(diào)節(jié)因子第四峰(PFIV)能提